小鼠腎連蛋白(NPNT)ELISA試劑盒深圳子科生物技術(shù)原理:
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
(2). 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。
(3). 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
(4). 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
(5). 此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測(cè)定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù);
小鼠腎連蛋白(NPNT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定具體步驟:
1.確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng) 90 分鐘。
4.反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應(yīng) 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng) 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 (注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異,顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11.用酶標(biāo)儀在 450nm 測(cè)定 OD值。
實(shí)驗(yàn)說明:
1.試劑盒保存:-20℃(較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí));2-8℃(頻繁使用時(shí))。
2.濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
3.中、英文說明書可能會(huì)有不一致之處,請(qǐng)以英文說明書為準(zhǔn)。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
小鼠腎連蛋白(NPNT)ELISA試劑盒01182P Aspergillus flavus derived from ATCC® 9643™* 黃曲霉 ATCC® 9643™* 2株/包
01021P Aspergillus fumigatus derived from ATCC® 204305™* 煙曲霉 ATCC® 204305™* 2株/包
0245P Aspergillus niger derived from ATCC® 16888™* 黑曲霉 ATCC® 16888™* 2株/包
0500P Aspergillus niger derived from ATCC® 6275™* 黑曲霉 ATCC® 6275™* 2株/包
0177P Aspergillus oryzae derived from ATCC® 10124™* 米曲霉 ATCC®10124™* 2株/包
0532P Aspergillus ustus derived from ATCC® 10760™* 焦曲霉 ATCC® 10760™* 2株/包
01081P Aureobasidium pullulans var. melanigenum derived from ATCC® 15233™* 出芽短梗霉 ATCC® 15233™* 2株/包
0515P Bacillus atrophaeus derived from ATCC® 51189™* ATCC® 51189™* 2株/包
0953P Bacillus atrophaeus derived from ATCC® 9372™* ATCC® 9372™* 2株/包
01008P Bacillus badius derived from ATCC® 14574™* 栗褐芽胞桿菌 ATCC® 14574™* 2株/包
0998P Bacillus cereus derived from ATCC® 10876™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC® 10876™* 2株/包
0256P Bacillus cereus derived from ATCC® 11778™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC®11778™* 2株/包
0999P Bacillus cereus derived from ATCC® 13061™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC® 13061™* 2株/包
0200P Bacillus cereus derived from ATCC® 14579™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC®14579™* 2株/包
0509P Bacillus cereus derived from ATCC® 2™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC® 2™* 2株/包
0198P Bacillus cereus derived from ATCC® 33019™* 蠟樣芽胞桿菌 ATCC® 33019™* 2株/包
0330P Bacillus cereus derived from NCIMB 7464 蠟樣芽胞桿菌 NCIMB 7464 2株/包
0507P Bacillus circulans derived from ATCC® 4516™* 環(huán)狀芽胞桿菌 ATCC® 4516™* 2株/包
0140P Bacillus circulans derived from ATCC® 61™* 環(huán)狀芽胞桿菌 ATCC® 61™* 2株/包