?；|(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3) ELISA試劑盒兩種設(shè)定空白對照的方案： 
（1）將 TMB 空白顯色孔設(shè)為對照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去 TMB 空白顯色孔的 吸光值后，在坐標(biāo)紙上畫出曲線，以吸光值作為縱坐標(biāo)，以濃度作為橫坐標(biāo) 。 
（2）將零孔設(shè)為對照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后，得到的數(shù)據(jù)可以 直接在坐標(biāo)紙上畫出曲線。 

?；|(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3) ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測定具體步驟：
1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2．將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3．酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng) 90 分鐘。 
4．反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5．將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應(yīng) 60 分鐘。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。 
7．將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應(yīng) 30 分鐘。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 （注意：顯色時(shí)間供參考，因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異，顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后 3-4 孔差別不明顯）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。 
11．用酶標(biāo)儀在 450nm 測定 OD值。

注意：收到我公司產(chǎn)品請*時(shí)間確認(rèn)試劑盒是否有破損，酶標(biāo)板是否封閉，使用前 TMB顯色液應(yīng)為無色透明溶液，若發(fā)現(xiàn)顏色異常，或者其他問題請及時(shí)與我司售后人員進(jìn)行，我們會(huì)*次安排進(jìn)行退換。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染，底物請避光保存。使用之后所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理，以免造成污染！

牛基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3) ELISA試劑盒N-三羥甲基-甲基-3-氨基-丙磺酸（TAPS）        10g
3-乙基-9-氨基咔唑 （3-Amino-9-Ethylcarbazole，AEC）        500mg
5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸（BCIP）        100mg
BCIP/NBT試劑（BCIP-NBT Solution）        10ml
Bis Benzimide Hoechst No.33258 熒光染料        25mg
Bis Benzimide Hoechst No.33224 熒光染料        25mg
亮綠（Brilliant Green）        10g
溴麝香草酚蘭（Bromothymol Blue Na）        5g
溴酚蘭（Bromophenol Blue）        5g
X-gal （5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷, 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside）        100mg
剛果紅（Congo Red）        25g
考馬斯亮藍(lán)G-250（Coomassie Brilliant Blue G-250）        5g
考馬斯亮藍(lán)R-250（Coomassie Brilliant Blue R-250）        5g
考馬斯亮藍(lán)蛋白電泳染色液（Coomassie Staining Solution））        100ml
二氨基聯(lián)苯胺（Diaminobenzidine,DAB）        0.5g
伊紅 Y（Eosin Y Sodium）        10g
溴化乙錠（Ethidium Bromide，EB）        500mg
固綠 （Fast Green，F(xiàn)CF）        5g
固藍(lán) BB （Fast Blue BB）        10g
固藍(lán) RR        5g
曲拉通 X-114（Triton X-114）        100ml
丙烯酰胺（Acrylamide）        100g
甲叉雙丙烯酰胺（Bis-Acrylamide）        10g
30%丙烯酰胺溶液（30％ Acrylamide Solution, AcryBis）        100ml
過硫酸銨（Ammonium Persulfate）        25g
蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（Protein Marker）        20T
彩虹預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（Prestained Protein Marker,Rainbow Marker）        20T
藍(lán)色預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（Prestained Protein Marker，Blue Marker）        20T
十二烷基硫酸鈉（SDS）        100g
SDS-PAGE凝膠制備試劑盒        40-60
蛋白電泳上樣緩沖液（SDS-PAGE Loading Buffer, 5X）        0.5ml
Tris-甘氨酸蛋白電泳液（SDS-PAGE蛋白電泳液，SDS-PAGE Running Buffer，10X）        250ml
四甲基乙二胺（TEMED）        5ml
蛋白印跡轉(zhuǎn)膜電泳液（Western Blot Transfer Buffer，10X）        250ml