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小鼠干擾素誘導蛋白10(IP-10)ELISA試劑盒

時間:2017-3-17閱讀:151
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小鼠干擾素誘導蛋白10(IP-10)ELISA試劑盒試劑的準備:
1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
500pg/ml(6號標準品)  原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
250pg/ml(5號標準品)  100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
125pg/ml(4號標準品)  100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
62.5pg/ml(3號標準品)  100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
31.2pg/ml(2號標準品)  100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
15.6pg/ml(1號標準品)  100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0pg/ml   (空白對照)   原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
 
小鼠干擾素誘導蛋白10(IP-10)ELISA試劑盒試劑盒性能: 
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
 
操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
結(jié)果判斷與分析:
1、 儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的LTB4標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的LTB4含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

小鼠干擾素誘導蛋白10(IP-10)ELISA試劑盒生物素標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
FITC標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
蛋白質(zhì)A標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
HRP標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
AP標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
TRITC標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
Cy2標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
Cy3標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
Cy5標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
EGFP標記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
GST(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
HA(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
FLAG(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
P53(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
HIS(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
ACTIN(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升
GPDGP(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)    100微升

 

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