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大鼠尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定具體步驟:
1.確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng) 90 分鐘。
4.反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應(yīng) 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng) 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 (注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異,顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11.用酶標(biāo)儀在 450nm 測(cè)定 OD值。

大鼠尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)ELISA試劑盒相關(guān)產(chǎn)品如下:
Biotin-11-dUTP , 1mM solution 核苷酸溶液 / 50ul 子科ZIKER
10X Taq Buffer With KCl;100mM Tris-HCl (pH 8.8,25℃),500mM KCl, 緩沖液 / 4x1.25ml 子科ZIKER
0.8%(v/v)Nonidet P40 緩沖液 / 4x1.5ml 子科ZIKER
dCTP 100mM solution 核苷酸溶液 / 0.25ml 子科ZIKER
Taq DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 200U 子科ZIKER
Taq DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 1000U 子科ZIKER
Taq DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 5000U 子科ZIKER
Hotstart DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 200U 子科ZIKER
Hotstart DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 1000U 子科ZIKER
pfu DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 100U 子科ZIKER
pfu DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 200U 子科ZIKER
pfu DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 500U 子科ZIKER
Taq Plus DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 100U 子科ZIKER
Taq Plus DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 500U 子科ZIKER
Long DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 100U 子科ZIKER
Long DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 200U 子科ZIKER
Long DNA Polymerase 高溫聚合酶 / 500U 子科ZIKER
dNTP Mixture each 10mM solution 核苷酸溶液 / 1.0ml 子科ZIKER
dNTP Mixture each 2mM solution 核苷酸溶液 / 1.0ml 子科ZIKER
0.8%(v/v)Nonidet P40。15mM MgCl2。 緩沖液 / 4x1.5ml 子科ZIKER
10X Taq Buffer With (NH4)2SO4 緩沖液 / 4x1.25ml 子科ZIKER