實驗原理受體細胞經(jīng)過一些特殊方法如化學(xué)試劑法的處理后，細胞膜的通透性發(fā)生了暫時性的改變，成為能允許外源DNA分子進入的感受態(tài)細胞。進入受體細胞的DNA分子通過復(fù)制，表達實現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。將經(jīng)過轉(zhuǎn)化后的細胞在篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即可篩選出轉(zhuǎn)化子(即帶有異源DNA分子的受體細胞)。
CaCl2法的基本原理：細菌處于0℃，CaCl2低滲溶液中，細胞膨脹成球形，外源DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸鹽混合物黏附于細胞表面，經(jīng)短時間42℃熱激處理，促進細胞吸收DNA復(fù)合物。將細菌放置在非選擇性培養(yǎng)基中保溫一段時間，促使在轉(zhuǎn)化過程中獲得的新的表型，如氨芐青霉素耐藥（Ampr）得到表達，然后將此細菌培養(yǎng)物涂在含Amp的選擇性培養(yǎng)基上，倒置培養(yǎng)過夜，可獲得細菌菌落。
轉(zhuǎn)化(Transformation)是將外源DNA分子引入受體細胞，使之獲得新的遺傳性狀的一種手段，它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)域的基本實驗技術(shù)。
一、材料
pUC19質(zhì)粒，大腸桿菌感受態(tài)，1.5ml塑料離心管，離心管架，
1000 ul、200ul槍頭，9cm培養(yǎng)皿，一次性濾膜（0.22um），大量碎冰
二、設(shè)備
微量移液器(2μl,200μl,1000μl)，高壓蒸汽消毒器(滅菌鍋)，培養(yǎng)箱，恒溫水浴鍋，恒溫搖床，離心機 超凈工作臺，雙蒸水器，冰箱等。
三、試劑準備
LB固體培養(yǎng)基
LB液體培養(yǎng)基
氨芐青霉素（apm）：無菌水配置成100mg/ml溶液，用濾膜抽濾，-20℃保存
滅菌雙蒸水ddH2O
四、實驗操作
（1） 平板的制備：LB固體培養(yǎng)基中加入Amp (100μg/ml)，轉(zhuǎn)化反應(yīng)前一天，倒置平板，保存。
（2） 分別用2個100µl感受態(tài)細胞懸液(如是冷凍保存液，則需化凍后馬上進行下面操作：
*組，質(zhì)粒DNA組：2 µl pUC19質(zhì)粒DNA +100µl感受態(tài)細胞懸液
第二組，空白對照組，2ul無菌水＋100µl感受態(tài)細胞懸液
（3） 將以上各樣品輕輕搖勻，冰上放置20-30min，于42℃水浴中保溫90s，然后迅速冰上冷卻2min
（4） 立即向上述管中分別加入0.4ml LB液體培養(yǎng)基（在超凈工作臺操作，不需要在冰上），使總體積到0.5ml，搖勻后于37℃振蕩培養(yǎng)約30-60min，使受體菌恢復(fù)正常生長狀態(tài)，并使轉(zhuǎn)化體表達抗生素基因產(chǎn)物(Ampr)。
（5） 將培養(yǎng)液以5000rmp離心2min，在超凈工作臺取各樣品培養(yǎng)液0.1ml在平板上涂布，分別接種于含抗菌素LB平板培養(yǎng)基上（做好標記，日期），涂勻。
（6） 在菌液*被培養(yǎng)基吸收后，培養(yǎng)皿倒置于37℃培養(yǎng)箱中過夜(12-16小時)，
觀察轉(zhuǎn)化子出現(xiàn)的情況，待菌落生長良好而又未互相重疊時停止培養(yǎng)。（子科生物技術(shù)部編輯）