摘要：制藥工業(yè)潔凈室內(nèi)存在許多抑制微生物生長(zhǎng)因素，消除這些影響微生物生長(zhǎng)的因素，是正確評(píng)估潔凈室微生物污染的關(guān)鍵；環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的選擇不當(dāng)也不能正確評(píng)估潔凈室微生物的污染。
關(guān)鍵詞：假陰性；假陽性；環(huán)境影響因素；預(yù)制培養(yǎng)基平板
 
Abstract: The clean rom of the pharmaceutical industry exists to inhibitmicrobial growth factors, the elimination of these factors affect microbialgrowth is the key to correctly assess the microbial contamination of the cleanroom; improper selection of the environmental monitoring medium can notcorrectly assess the microbial contamination of the clean room.
Keywords: False negative；False positive；EnvironmentalFactors i；Ready to- use Culture Media Plate
 
    目前國(guó)內(nèi)各制藥企業(yè)環(huán)境監(jiān)測(cè)中微生物的監(jiān)測(cè)方法大多依據(jù)GB/T 16293-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測(cè)試方法和GB/T 16294-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測(cè)試方法進(jìn)行。以這兩個(gè)國(guó)標(biāo)來實(shí)施監(jiān)測(cè)制藥企業(yè)潔凈室的微生物，對(duì)大多數(shù)生產(chǎn)普通制劑或API的廠家來說是沒有問題的。
   但是對(duì)于抗生素企業(yè)和部分制劑廠家來說，僅僅按照這兩個(gè)國(guó)標(biāo)推薦的兩種培養(yǎng)基大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）和沙氏瓊脂培養(yǎng)基（SDA）來監(jiān)測(cè)潔凈室的微生物則是不全面的。在抗生素生產(chǎn)企業(yè)，其潔凈室內(nèi)不可避免地混雜著一定量的抗生素粉塵，如果沒有采取能夠消除抗生素粉塵對(duì)微生物生存和生長(zhǎng)的影響的措施，就采用國(guó)標(biāo)的方法測(cè)試該環(huán)境中的微生物，得到的監(jiān)測(cè)結(jié)果，不可避免的將是一個(gè)“假陰性”的結(jié)果；同樣，部分藥物的API對(duì)個(gè)別微生物也有不同程度的抑制或殺滅作用，要是不消除這類影響微生物生存和生長(zhǎng)的環(huán)境因素，同樣會(huì)得到“假陰性”的結(jié)果。
    現(xiàn)在國(guó)內(nèi)絕大多數(shù)制藥企業(yè)環(huán)境監(jiān)測(cè)中微生物取樣的培養(yǎng)基是檢驗(yàn)員人工制作，培養(yǎng)基滅菌，澆制平板，預(yù)培養(yǎng)后剔除污染的平板后置冷藏箱內(nèi)待用，保存期限一般不超過3周。采用這樣的方法進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)微生物的取樣，因?yàn)闊o法從根本上保證取樣平板的無菌性，得到的監(jiān)測(cè)結(jié)果不可避免的是一個(gè)“假陽性”的結(jié)果。
“假陰性”和“假陽性”兩個(gè)結(jié)果都沒有真實(shí)的還原潔凈室內(nèi)微生物的實(shí)際狀況。取樣測(cè)試的結(jié)果與潔凈室內(nèi)微生物實(shí)際狀況出現(xiàn)了偏差。這樣的結(jié)果如果發(fā)生的*或B級(jí)區(qū)，由此產(chǎn)生的眾多調(diào)查、重復(fù)測(cè)試等工作量，將會(huì)導(dǎo)致大量的經(jīng)濟(jì)損失。
   “假陰性”和“假陽性”兩個(gè)結(jié)果的產(chǎn)生，就是因?yàn)樵诃h(huán)境監(jiān)測(cè)微生物取樣測(cè)試時(shí)忽視了這樣兩個(gè)問題，忽視了潔凈環(huán)境中存在的抑菌成分；忽視了取樣平板的無菌性。
一、潔凈環(huán)境中的抑菌成分的消除
制藥企業(yè)潔凈環(huán)境中的抑菌成分主要有這樣兩大類：1、API；2、消毒劑殘留。
1、API主要分為這樣兩部分：抗生素和部分API
    消除抗生素粉塵的殘留，采用的方法就是降解取樣時(shí)落在培養(yǎng)基平板上的抗生素，在取樣平板的培養(yǎng)基內(nèi)添加一定量的酶，對(duì)于β-內(nèi)酰胺類抗生素，添加β-內(nèi)酰胺酶（即*酶）；對(duì)于頭孢類抗生素，則添加*酶。
    而API的消除，則主要依據(jù)：“中國(guó)藥典”2010年版 附錄109頁  附錄XI J 表1：“常見干擾物中和劑或滅活方法”  中所對(duì)應(yīng)的中和或滅活方法，還有一個(gè)方法就是借鑒相關(guān)產(chǎn)品微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證中所采取的中和或滅活方法來消除API的影響。
2、消毒劑殘留
    制藥企業(yè)潔凈環(huán)境每天都在使用消毒劑，怎樣確定殘留的消毒劑沒有影響微生物的生長(zhǎng)？選擇什么樣的培養(yǎng)基可以zui大限度的衡量潔凈室表面的微生物水平？理論知識(shí)告訴我們，*、吐溫-80組合后能夠消除季胺類化合物（*、*等）消毒劑的影響；*、吐溫-80和L-*組合后能夠消除醛類（甲醛、戊二銓等）和酚類（*、*等）消毒劑的影響；*能夠消除鹵素類消毒劑（碘伏、碘酒等）的影響等等。
現(xiàn)在，國(guó)外制藥企業(yè)環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)時(shí)，用于潔凈室表面取樣的培養(yǎng)基大多為大豆酪蛋白+*+吐溫-80瓊脂培養(yǎng)基（即TSAWLP）。選擇這樣的培養(yǎng)基就可以有效的降解可能殘留在潔凈室表面的消毒劑（主要是季胺類化合物消毒劑）的殘留。
 
二、取樣平板的無菌性
    《中國(guó)藥典》2010年版中對(duì)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基平板有明確的要求。用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應(yīng)進(jìn)行100%的預(yù)培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中以避免出現(xiàn)假陽性的結(jié)果。［1］由此可見，在法規(guī)層面，對(duì)于制藥企業(yè)潔凈室環(huán)境中微生物測(cè)試的培養(yǎng)基提出了嚴(yán)格要求。要求在潔凈室取樣時(shí)采用無菌的預(yù)制培養(yǎng)基平板（即Ready to- use Culture Media Plate）取樣。
    事實(shí)上，國(guó)外眾多的制藥企業(yè)用于潔凈環(huán)境測(cè)試的培養(yǎng)基平板，包括浮游菌、沉降菌取樣的90mm普通平板和表面取樣的55mm接觸平板都是無菌的預(yù)制平板培養(yǎng)基?！吨袊?guó)藥典》2010年版中對(duì)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基的要求就是出自USP <1117>MICROBIOLOGICAL BESTLABORATORY PRACTICES  章節(jié)。［2］
    對(duì)比中國(guó)藥典和USP兩部藥典在環(huán)境監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的具體要求，USP還特別強(qiáng)調(diào)了預(yù)培養(yǎng)之后必須要進(jìn)行的促生長(zhǎng)試驗(yàn)（即Growth Promotion Testing），這里也凸顯了USP在強(qiáng)調(diào)避免微生物測(cè)試結(jié)果“假陽性”的同時(shí)，更加關(guān)注的是微生物測(cè)試結(jié)果的“假陰性”?，F(xiàn)代微生物檢測(cè)領(lǐng)域，“假陰性”遠(yuǎn)比“假陽性”要可怕，制藥企業(yè)潔凈環(huán)境中微生物的檢測(cè)，使用無菌預(yù)制平板培養(yǎng)基，不僅*杜絕了測(cè)試結(jié)果的“假陽性”，同時(shí)也消除了“假陰性”的可能。也符合了中國(guó)GMP2010中大力提倡的風(fēng)險(xiǎn)管理的理念。
 
三、制藥企業(yè)潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)的解決方案
    針對(duì)制藥企業(yè)潔凈環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)中忽視的問題，在設(shè)計(jì)一個(gè)潔凈室的微生物監(jiān)測(cè)方案時(shí)，應(yīng)該著力避免這兩個(gè)問題。在培養(yǎng)基中添加β-內(nèi)酰胺酶或*酶是一定要做驗(yàn)證的，就是要驗(yàn)證所添加酶或中和劑的種類和劑量能夠*降解掉環(huán)境中的抑菌因素，從而真實(shí)還原本企業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中可能存在的微生物的真實(shí)水平。避免環(huán)境監(jiān)測(cè)微生物“假陽性”或“假陰性”結(jié)果，另一行之有效方法就是采用無菌預(yù)制培養(yǎng)基平板（Ready to- use Culture Media Plate）取樣。