本法系依據(jù)在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)抗生素對(duì)微生物的抑制作用，比較對(duì)調(diào)品與供試品對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生的抑菌圈的大小，檢查供試品中*或四環(huán)素殘留量。

   磷酸鹽緩沖液（P H6 .0 )的制備 稱(chēng)取磷酸二氫鉀8.0g、*2.0g，加水溶解并稀釋至1000ml，經(jīng)121°C滅菌3 0分鐘。

   抗生素I 號(hào)培養(yǎng)基的制備 稱(chēng)取胨6g、牛肉提取粉1.5g、酵母浸出粉6g，加人適量水溶解后，加人瓊脂13?1 4 g ,加熱使之溶脹，濾過(guò)除去不溶物，加人葡萄糖lg , 溶解后加水至1000ml，調(diào)p H 值使滅菌后為6. 5?6. 6; 分裝于玻璃管或錐形瓶中，經(jīng)115°C滅菌30分鐘，4℃保存。

   對(duì)照品溶液的制備 取*對(duì)照品適量，用O.Olmol/L鹽酸溶解并稀釋成每lm l中含*10mg的溶液，精密量取適量，用磷酸鹽緩沖液稀釋成每lm l中含l.O μg的溶液。

   取四環(huán)素對(duì)照品適量，用*溶解并稀釋成每lm l中含0. 125μg的溶液。

菌懸液的制備 （1 )*懸液用于檢測(cè)*。取*（CMCC26003)營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，35?37°C培養(yǎng)20?2 2小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水或0 .9%無(wú)菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。

(2 )藤黃微球菌（Mz'crococcwWi^eMS)懸液用于檢測(cè)四環(huán)素。取藤黃微球菌[CMCC(B)28001] 營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，置26?2 7C培養(yǎng)2 4小時(shí)。臨用時(shí)，用0 .9%無(wú)菌氣化鈉溶液將菌苔洗下，備用。

   檢査法 取直徑8cm或10cm的培養(yǎng)皿，注人融化的抗生素I I號(hào)培養(yǎng)基15?20ml，使在碟底內(nèi)均勻攤布，放置水平臺(tái)上使凝固，作為底層。取抗生素II號(hào)培養(yǎng)基10?15ml置于1支50°C水浴預(yù)熱的試管中，加人0.5%?1.5% (ml/ml) 的菌懸液300μl混勻，取適量注人已鋪制底層的培養(yǎng)皿中，放置水平臺(tái)上，冷卻后，在每個(gè)培養(yǎng)皿上等距離均勻放置鋼管(內(nèi)徑6?8mm、壁厚1?2mm、管髙10?15mm的不繡鋼管，表面應(yīng)光滑平整），于鋼管中依次滴加供試品溶液、陰性對(duì)照溶液（磷酸鹽緩沖液）及對(duì)照品溶液。培養(yǎng)皿置37℃培養(yǎng)18?22小時(shí)。

   結(jié)果判定 對(duì)照品溶液有抑菌圈，陰性對(duì)照溶液無(wú)抑菌圈。供試品溶液抑菌圈的直徑小于對(duì)照品溶液抑菌圈的直徑時(shí)判為陰性；否則判為陽(yáng)性。

【附注】本試驗(yàn)應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，使用的玻璃儀器、鋼管等應(yīng)無(wú)菌。