雙酚A（BPA）elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟：

在完成標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的加樣后，輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板以確保液體充分混勻，隨后用封板膜覆蓋板孔，避免蒸發(fā)和污染。將酶標(biāo)板置于37℃恒溫箱中孵育30分鐘，使抗原與抗體充分結(jié)合。

孵育結(jié)束后，小心揭開(kāi)封板膜，棄去孔內(nèi)液體，在吸水紙上輕拍酶標(biāo)板以去除殘留液體。每孔加入300μL洗滌緩沖液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次。注意每次洗滌需，避免交叉污染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

洗滌完成后，每孔加入50μL酶標(biāo)試劑（HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體），再次用封板膜覆蓋，37℃孵育30分鐘。此步驟通過(guò)酶標(biāo)抗體與復(fù)合物的特異性結(jié)合，為后續(xù)顯色反應(yīng)奠定基礎(chǔ)。

重復(fù)上述洗滌步驟5次后，每孔依次加入50μL顯色劑A和50μL顯色劑B，輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡。室溫避光靜置15分鐘，溶液將逐漸呈現(xiàn)藍(lán)色（若目標(biāo)物濃度高，顏色會(huì)更深）。最后，每孔加入50μL終止液，溶液顏色立即由藍(lán)變黃，此時(shí)需在15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔OD值。

數(shù)據(jù)讀取后，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)曲線方程計(jì)算樣本中雙酚A的濃度。若樣本OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，需用稀釋液調(diào)整后重新檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，妥善處理廢液及耗材，清潔操作臺(tái)，確保實(shí)驗(yàn)室安全。