微生物常規(guī)鑒定技術(shù)
一、形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察
1、微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察
微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過染色，在顯微鏡下對其形狀、大小、排列方式、細胞結(jié)構(gòu)（包括細胞壁、細胞膜、細胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性進行觀察，直觀地了解細菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性，根據(jù)不同微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達到區(qū)別、鑒定微生物的目的。
2、微生物培養(yǎng)特性觀察
革蘭染色法，丹麥病理學家C.Gram 1884年創(chuàng)立（1）涂片 （2）晾干 （3）固定 （4）結(jié)晶紫色染色：1min。水洗 （5）媒染：滴加盧哥氏碘液，媒染1min。水洗（6） 脫色：將玻片傾斜，連續(xù)滴加95%乙醇脫色20～25s至流出液無色，立即水洗?！。?） 復染：滴加蕃紅復染5min。水洗（8） 晾干：晾干或者用吸水紙吸干。?。?） 鏡檢：先用低倍，再用高倍，zui后用油鏡?！。?0）實驗完畢后的處理：①浸過油的鏡頭：a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2～3次。c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2～3次。注意擦鏡頭時向一個方向擦拭。②細菌染色玻片用廢擦鏡紙將香柏油擦干。
微生物培養(yǎng)特性的觀察是微生物檢驗鑒別中的一項重要內(nèi)容。
1）細菌的培養(yǎng)特征 包括以下內(nèi)容：在固體培養(yǎng)基上，觀察菌落大小、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等。在液體培養(yǎng)中的表面生長情況（菌膜、環(huán)）混濁度及沉淀等。半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運動、擴散情況。
2）霉菌酵母菌的培養(yǎng)特征：大多數(shù)酵母菌沒有絲狀體，在固體培養(yǎng)基上形成的菌落和細菌的很相似，只是比細菌菌落大且厚。液體培養(yǎng)也和細菌相似，有均勻生長、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的絲狀體，菌絲粗長，在條件適宜的培養(yǎng)基里，菌絲無限伸長沿培養(yǎng)基表面蔓延。霉菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲都常帶有不同顏色，因而菌落邊緣和中心，正面和背面顏色常常不同，如青霉菌：孢子青綠色，氣生菌絲無色，基內(nèi)菌絲褐色。霉菌在固體培養(yǎng)表面形成絮狀、絨毛狀和蜘蛛網(wǎng)狀菌落。
二、生理生化試驗
微生物生化反應：指用化學反應來測定微生物的代謝產(chǎn)物，生化反應常用來鑒別一些在形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的微生物。因此微生物生化反應是微生物分類鑒定中的重要依據(jù)之一。
微生物檢驗中常用的生化反應有：
糖或醇類發(fā)酵試驗 淀粉水解試驗 V-P試驗 甲基紅（MR）試驗 靛基質(zhì)（Indole）試驗
過氧化氫酶試驗 硝酸鹽還原試驗 明膠液化試驗 尿素酶（Urease）試驗 氧化酶試驗
硫化氫（H2S）試驗 三糖鐵（TSI）瓊脂試驗 氨基酸脫羧酶的測定 耐鹽性試驗 *酶的測定
石蕊牛奶反應 酪蛋白水解 苯*脫氨試驗 氰化鉀試驗 對*的抗性
硫化氫-靛基質(zhì)-動力（SIM）瓊脂試驗 含碳化合物的利用（檸檬酸鹽或丙酸鹽利用）
三、血清學試驗
血清學反應是指：相應的抗原與抗體在體外一定條件下作用，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀、凝集現(xiàn)象。在食品微生物檢驗中，常用血清學反應來鑒定分離到的細菌，以zui終確認檢測結(jié)果。
在細菌的檢測中，應用zui多的是凝集試驗、沉淀反應和補體結(jié)合試驗。
血清學試驗的一般特點：
1）抗原體的結(jié)合具有特異性，當有共同抗原體存在時，會出現(xiàn)交叉反應。
2）抗原體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合，這種結(jié)合雖相當穩(wěn)定，但是可逆的。
3）抗原體的結(jié)合是按一定比例進行的，只有比例適當時，才能出現(xiàn)可見反應。
4）血清學反應大體分為兩個階段進行，但其間無嚴格界限。*階段為抗原體特異性結(jié)合階段，反應速度很快，只需幾秒至幾分鐘反應即可完畢，但不出現(xiàn)肉眼可見現(xiàn)象。第二階段為抗原體反應的可見階段，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補體結(jié)合反應等。反應速度慢，需幾分、幾十分以至更長時間。而且，在第二階段反應中，電解質(zhì)、PH、溫度等環(huán)境因素的變化，都直接影響血清學反應的結(jié)果。
1、凝集反應（Agglutination reaction）
顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應。其中的抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。在該反應中，因為單位體積抗體量大，做定量實驗時，應稀釋抗體。
1）直接凝集反應：a. 玻片凝集法； b. 試管凝集法 2）間接凝集反應
2、沉淀反應（Precipitation test）
可溶性抗原與相應抗體結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時間，形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應。反應中的抗原稱為沉淀原，抗體為沉淀素。由于在單位體積內(nèi)抗原量大，為了不使抗原過剩，故應稀釋抗原，并以抗原的稀釋度作為沉淀反應的效價。
1）環(huán)狀沉淀反應 2）絮狀沉淀反應3）瓊脂擴散試驗
3、補體結(jié)合反應（Complement fixation reaction）
補體結(jié)合反應是在補體參與下，以綿羊紅細胞和溶血素作為指示系統(tǒng)的抗原抗體反應。補體無特異性，能與任何一組抗原抗體復合物結(jié)合而引起反應。如果補體與綿羊紅細胞、溶血素的復合物結(jié)合，就會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象; 如果與細菌及相應抗體復合物結(jié)合，就會出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。因此，如果出現(xiàn)溶菌，說明抗原抗體是相對應的（試驗結(jié)果陽性）；如果出現(xiàn)溶血，說明抗原抗體不相對應（陰性）。
此反應操作復雜，敏感性高，特異性強，能測出少量抗原和抗體，所以應用范圍較廣。
其它方法：熒光抗體技術(shù), ELISA, 免疫組化
