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抗原修復技術(shù)主要分加熱法抗原修復技術(shù)和非加熱法抗原修復技術(shù),加熱法中又分為微波加熱法、單純加熱法和高壓加熱法;非加熱法主要有酶消化和酸水解等方法。
(1) 微波加熱法抗原修復
(2) 單純加熱法抗原修復技術(shù):將切片放入盛有檸檬酸緩沖液的容器中,置電爐(600W)上加熱至沸騰,并持續(xù)10min.S.R.Shi等人用單純加熱方法與微波加熱方法比較IHC染色強度,結(jié)果顯示兩種加熱方法導致相同的染色強度。
(3) 高壓加熱法抗原修復技術(shù)程序:R.W.Shin 等人發(fā)展了含水高壓鍋煮沸方法,來增強福爾馬林固定的腦組織Tau蛋白免疫反應(yīng)性。
(4) 非加熱法抗原修復技術(shù):非加熱法抗原修復技術(shù)包括酶消化和酸水解等方法。目前,應(yīng)用zui多的是酶消化法,酶消化是以化學的方法來打斷醛鍵,修復抗原??乖迯偷姆椒ㄟx擇,關(guān)系到組織抗原能否暴露充分,這對免疫酶組織化學方法的結(jié)果有很大影響。因此,應(yīng)當根據(jù)不同的抗原特點,采用不同的修復方法。對某些細胞內(nèi)抗原(如Fas\Bax與FⅧ等)和細胞間質(zhì)抗原(如Laminin與CoIV等)則需要用酶消化法處理切片。常用的消化酶為*和*。一般說來,*消化能力較*弱,主要用于細胞內(nèi)抗原的消化;*主要用于細胞間抗原的消化。實驗中要認真參照抗體說明書,進行消化酶的選擇。
總之,以高壓加熱方法和微波加熱方法較為穩(wěn)定,高壓加熱法效果優(yōu)于微波加熱方法和單純加熱方法。溶液的濃度對修復效果無任何影響,而pH則影響較大。緩沖液以檸檬酸緩沖液和Tris-HC1較常用。一般而言,應(yīng)用加熱法時,溫度高則抗原修復時間短。另外,第251醫(yī)院根據(jù)臨床評理診斷、鑒別診斷和研究的實際需要,創(chuàng)造了*-尿素聯(lián)合消化技術(shù)、鹽酸水解暴露抗原技術(shù)和MV-表面活性劑Triton X-100(MW-TX)修復抗原技術(shù)。抗原暴露或抗原修復方法較多,其中微波(MW)-枸櫞酸緩沖液使用較多,效果。微波修復抗原的方法是石蠟切片脫蠟并水洗后放入修復液中,用250W的輸出功率,待冷卻至室溫按常規(guī)處理。目前抗原修復技術(shù)已成功應(yīng)用在BioTek全自動免疫組化染色儀中。
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