（六）應(yīng)用親和素和*的ELISA
親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個*分子親密結(jié)合。現(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉和素（strepavidin）。*（biotin）又稱維生素H，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學(xué)方法制成的衍生物，*－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成*化的產(chǎn)物。親和素與*的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，但特異性強，親和力大，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個親和素分子有4個*分子的結(jié)合位置，可以連接更多的*化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親和素和*與ELIS偶聯(lián)起來，就可大提高ELISA的敏感度。
親和素－*系統(tǒng)在ELISA中的應(yīng)用有多種形式，可用于間接包被，亦可用于終反應(yīng)放大?？梢栽诠滔嗌舷阮A(yù)包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與*結(jié)合，通過親和素－*反應(yīng)而使*化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結(jié)合點充分暴露。另外，在常規(guī)ELISA中的酶標抗體也可用*化的抗體替代，然后連接親和素－酶結(jié)合物，以放大反應(yīng)信號。
ELISA 普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗。 在這種方法中， 通常標準配體是固定的， 通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵。 通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體， 而且zui初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量。 第二種抗體能識別抗體的末端， 在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng)， 從而使溶液顯色。
