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冷泉港實驗室發(fā)表鋅指核酸酶和免疫共沉淀的新Protocol

閱讀:897發(fā)布時間:2013-8-30

鋅指核酸酶是一種人工制做限制性內(nèi)切酶,通過將鋅指DNA結(jié)合區(qū)與限制性內(nèi)切酶的DNA切割區(qū)融合獲得。ZFNs能夠用于在多種細胞的基因組中切除大段的片段。8月份在Cold Spring Harbor Protocols雜志上,Jin-Soo Kim和他的合作者發(fā)飆了題為《鋅指核酸酶誘導的定向染色體缺失分析》一文中,詳細介紹了如何在培養(yǎng)的細胞中對因ZFNs表達誘導的染色體缺失進行檢測和分析。該方法使得研究人員能夠很容易地通過PCR相關(guān)實驗對ZFN引起的基因組缺失的頻率進行檢測和評估

  免疫共沉淀是一種用于分離純化目的蛋白的常用方法。將抗目的蛋白的抗體與細胞提取物一起培養(yǎng),然后將抗原/抗體結(jié)合物從溶液中分離出來即可。這個方法中,制備細胞提取物對試驗成功至關(guān)重要。必須選擇適合免疫共沉淀抗體識別目的蛋白表位的細胞裂解條件。發(fā)表在8月份Cold Spring Harbor Protocols雜志上的一篇文章《用于免疫共沉淀細胞的裂解》詳細介紹了不同培養(yǎng)方式細胞的裂解條件。這篇文章比較了常用細胞裂解緩沖液和蛋白酶抑制劑的搭配。


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