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中性粒細胞趨化試驗檢測IL-8

閱讀：702發(fā)布時間：2012-5-12

ID8是中性粒細胞的激活劑和趨化因子；本法通過檢測中性粒細胞的遷移距離來反映IL-8活性。
（1）配制2倍濃度的DMEM培養(yǎng)液100mL，其中含20mL的FCS，75mgNaHC03，置48C水浴預溫。
（2）配制2％瓊脂糖，水浴中保溫48℃左右時，與上述2XDMEM等量混勻。
（3）制片（3mlJ片），室溫凝固后，放4~C 30～60min進一步凝固，打孔。
（4）分離人外周血中性粒細胞，用DMEM調(diào)整細胞濃度為2．5×105／mL，取lOgL細胞懸液加人各組中心孔，上孔分別加10／uL含趨化因子的待檢樣品及rlL-8或其他陽性對照趨化因子，下孔加lOgLDMEM作陰性對照。
（5）將玻片放濕盒中，37~C溫育2h后，甲醇固定30min，瑞氏染液染片并干燥。
（6）顯微鏡下分別測量細胞從中心孑L邊緣朝向樣品孔游走的距離（趨化游走距離）及朝向陰性對照孔的游走距離（自發(fā)游走距離），趨化活性以趨化指數(shù)表示。
為證實樣品中趨化效應是IL-8特異的，還需將抗IL-8中和抗體先與待測樣品混合，孵育1h后，加入玻片孔中，觀察趨化反應。亦可用其他相關抗體阻斷試驗區(qū)別IL-8及其他趨化因子的作用。


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