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技術(shù)文章

補(bǔ)體C4溶血覆蓋技術(shù)

閱讀：672發(fā)布時(shí)間：2012-2-25

電泳是通過(guò)電場(chǎng)作用將C4遷移率不同的同種異型分離開(kāi)，然后依照分型標(biāo)準(zhǔn)定型。在某些情況下，C4A某種同種異型與C4B某種同種異型遷移率相同不易區(qū)分開(kāi)，此時(shí)可用溶血覆蓋技術(shù)加以區(qū)別。

1．原理 用肼處理豚鼠血清，可滅活其補(bǔ)體成分C4，使之成為幟缺乏的血清。將C4缺乏的豚鼠血清與致敏的SRBCl昆合，因缺乏C4，補(bǔ)體的攻膜效應(yīng)不能發(fā)揮，將?昆合物與一定濃度瓊脂糖混合傾注在電泳完畢的凝膠板上，凝膠板上C4區(qū)帶使混合物中的C4成分得以補(bǔ)償，溶血反應(yīng)發(fā)生，凝膠板上C4條帶區(qū)可出現(xiàn)透明溶血帶。C4B的溶血活性較C4A高，先發(fā)生溶血反應(yīng)，因此可用此法將不易區(qū)別的C4A與C4B區(qū)分開(kāi)來(lái)。

2．主要試劑
R4豚鼠血清的制備：取正常豚鼠血清lmL加0．16mol／L的水合肼0．1mL，37℃2ho
3．操作步驟
（1）取SRBC 5mL用生理鹽水洗3次，用GVB2+配成10％的濃度。
（2）取5mLl0％SRBC加50gL0．2mol／LEDTA和5mL 6U的溶血素混合，37℃30min。注意應(yīng)經(jīng)常搖勻，使抗原與抗體分子充分接觸，然后用生理鹽水洗2次，GV妒‘洗1次。
（3）根據(jù)凝膠板的大小做一個(gè)有機(jī)玻璃框，厚度為lmm，壓在電泳完畢的凝膠板上。
（4）用GVB2+配制1％的瓊脂糖，隔水煮沸，待其*透明后放50~C恒溫水浴中冷卻至50~C時(shí)加入1．5mLEA與1．5mLR4豚鼠血清，充分?昆合，傾注在凝膠板上。
（5）37℃孵育約10rain，直至觀察到C4B溶血帶出現(xiàn)且清晰為止。用1％戊二醛固定，PBS漂洗，干燥保存。


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