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技術(shù)文章

寡核苷酸切除和脫保護(hù)

閱讀：583發(fā)布時(shí)間：2011-9-19

寡核苷酸3，—OH和琥珀酰連接臂之間的酯鍵的切除在全自動(dòng)合成儀上是自動(dòng)進(jìn)行的，但也可以按照下列方法手工完成，全部操作都在通風(fēng)柜內(nèi)進(jìn)行。所需材料為：濃氨水溶液，帶螺蓋的小瓶（5m1），1．0ml氣密性注射器，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或快速真空干燥器。

具體操作步驟如下：
1）合成后，用氬氣干燥合成柱。
2）干燥合成柱后，從儀器上將其取下。用lml濃氨水溶液充滿(mǎn)注射器并將注射器接到柱的一端。將柱的另一端裝上一luer接頭和一針頭，將氨水溶液注入柱中，直到*滴冒出針尖。此時(shí)，柱子內(nèi)的固相載體應(yīng)該*浸泡在氨水溶液中。
3）將針插入橡皮塞中使注射器密封，在室溫下放置lh。
4）取下注射器針上的橡皮塞，將氨水溶液通過(guò)柱子壓人螺蓋的小瓶中，暫時(shí)擰上蓋子，重復(fù)步驟l～4次。zui后擰緊有3次氨水洗滌液的小瓶子。
5）要完成堿基脫保護(hù)，將樣品在55‘C下過(guò)夜。小瓶冷卻到室溫，取下蓋子，全部脫保護(hù)的寡核苷酸轉(zhuǎn)移到50ml的圓底燒瓶中，蒸發(fā)至干，為進(jìn)一步純化備用。


 


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