1．合成開始后檢查要點(diǎn)
合成開始時，檢查第二個核苷酸脫DMT所產(chǎn)生的橘色，保證一切正常。*個DMT的顏色不能作為提供資料的依據(jù)，因?yàn)樗禽d體上裝進(jìn)的*個核苷的量度。檢查合成柱是否滲漏，滲漏原因可能是由于柱子錯誤或柱子與合成儀上的luer接頭未擰緊所致。檢查監(jiān)視器上的詳細(xì)內(nèi)容，必要時重新存儲所需參數(shù)。
2．自動DNA合成儀上試劑的穩(wěn)定性
無論合成進(jìn)行到什么程度，試劑管道中的單體每幾分鐘就需要補(bǔ)充一次，不會出現(xiàn)嚴(yán)重的亞磷酰胺分解。但是如果儀器已經(jīng)1h以上未運(yùn)行，在合成開始前必須清洗試劑管路，除去管內(nèi)分解的試劑。即使在的條件下，試劑的壽命也是有限的，因此，要將在合成儀上存放2周以上的試劑棄去；對于合成30個堿基12 1-_的寡核苷酸，應(yīng)用的亞磷酰胺和四唑在合成儀上的時間應(yīng)短于一周。對于合成50mer或更長的寡核苷酸，應(yīng)該用新鮮的亞磷酰胺、四唑和乙腈。
3．自動DNA合成儀上的試劑更換
在某一合成期間任何一種試劑用完都會導(dǎo)致合成失敗，所以在合成前必須檢查所有儲液瓶內(nèi)的試劑量。如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度降至18~C以下，需要用電吹風(fēng)溫?zé)醿σ浩?，使某些結(jié)晶溶解。如果一個位置配有一個一次性的瓶塞，當(dāng)新瓶子放到合成儀上時，要檢查并更換瓶塞。任何裂開的瓶塞都不能使用，*性的瓶塞也要檢查。另外，要檢查試劑瓶口邊緣是否有缺口，缺口瓶在合成儀上塞不緊，不能輸送試劑。
4．合成中更換試劑瓶
在特定循環(huán)上單體縮合、封閉、氧化完成后，等待用乙腈清洗，并中斷循環(huán)和三個柱。然后按正常方法換瓶，取消所有中斷信息，重新開始合成，千萬不要讓合成中斷超過lmin，這樣會使偶聯(lián)率下降或造成合成失敗。
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