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技術(shù)文章

DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)

閱讀：604發(fā)布時(shí)間：2014-8-9

1、實(shí)驗(yàn)原理
鳥(niǎo)類血液中紅細(xì)胞有細(xì)胞核，細(xì)胞核內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成染色質(zhì)。利用DNA在0.12－0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度zui低，可使溶液中的DNA形成沉淀析出，通過(guò)過(guò)濾，得到初提取的DNA。再利用DNA不溶于酒精溶液，而細(xì)胞中其他物質(zhì)可溶于酒精的特點(diǎn)，進(jìn)一步提取含雜質(zhì)較少的DNA。
DNA遇二苯胺，加少許乙醛，沸水浴中顯藍(lán)色，利用這一原理可對(duì)DNA進(jìn)行鑒定。
2、方法步驟及改進(jìn),實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟
本實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵，是保證提取到足量且較純凈的DNA。因?yàn)镈NA在細(xì)胞中含量少，所以在下列步驟中應(yīng)特別注意：在步驟1中使用的雞血的量要在150ml左右。提取細(xì)胞核物質(zhì)時(shí)要充分?jǐn)嚢?min以上。在步驟4中加蒸餾水要控制好量，同時(shí)用竹筷緩緩攪動(dòng)使DNA聚集其上。在步驟5要充分?jǐn)嚢?，在步驟7中應(yīng)使用冷卻的酒精（至少在5℃以下存放24h）。因?yàn)镈NA易吸附在玻璃容器上，所以實(shí)驗(yàn)中使用塑料燒杯和試管，以減少DNA的損失。同時(shí)為了能在DNA鑒定步驟中較快、較好地出現(xiàn)藍(lán)色，可將相應(yīng)的NaCl溶液量和二苯胺試劑量都減少一半左右


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