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技術(shù)文章

β-半乳糖苷酶試驗

閱讀:810發(fā)布時間:2014-2-28

β-半乳糖苷酶試驗

液體法(ONPG法)

成分

鄰硝基苯β-D-半乳糖苷(ONPG) 60.0 mg

0.01mol/L 磷酸鈉緩沖液(pH7.5) 10.0 mL

1%蛋白胨水(pH7.5) 30.0 mL

制法

將ONPG溶于緩沖液內(nèi),加入蛋白胨水,以過濾法除菌,分裝于10mm×75mm 試管內(nèi),每管0.5mL,用橡皮塞塞緊。

試驗方法

自瓊脂斜面挑取培養(yǎng)物一滿環(huán)接種,于36 °C?1 °C培養(yǎng)1 h~3 h和24 h觀察結(jié)果。如果β-D-半乳糖苷酶產(chǎn)生,則于1 h~3 h變黃色,如無此酶則24 h不變色。

平板法(X-Gal法)

成分

蛋白胨 20.0 g

氯化鈉 3.0 g

5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal) 200.0 mg

瓊脂 15.0 g

蒸餾水 1 000.0 mL

pH 7.2?0.1

制法

將上述各成分加熱煮沸于1L水中,冷卻至25 ℃左右校正pH至7.2?0.1,115 °C 高壓滅菌10 min。傾注平板避光冷藏備用。

試驗方法

挑取瓊脂斜面培養(yǎng)物接種于平板,劃線和點種均可,于36 °C?1 °C培養(yǎng)18h~24 h觀察結(jié)果。如果β-D-半乳糖苷酶產(chǎn)生,則平板上培養(yǎng)物顏色變藍色,如無此酶則培養(yǎng)物為無色或不透明色,培養(yǎng)48 h~72 h后有部分轉(zhuǎn)為淡粉紅色。


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