1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中沉降菌的測試條件、測試方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)，無菌室或無菌區(qū)域（包括潔凈工作臺）的沉降菌的測定和環(huán)境的驗(yàn)證。
2 引用標(biāo)準(zhǔn)
下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)版本的可能性。
YY/T0188.6—1995藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程 第6部分：藥品生物測定法
3 定義
本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義
3.1 潔凈室（區(qū)） clean room（area）
對塵粒及微生物污染規(guī)定需進(jìn)行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用均具有減少對該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功能。
3.2 潔凈工作臺 cleaning work station
一種工作臺或者與之類似的一個(gè)封閉圍擋工作區(qū)其特點(diǎn)是自身能夠供給經(jīng)過過濾的空氣或氣體，如垂直層流置、水平層流罩、垂直層流潔凈工作、水平層流潔凈工作臺、自凈器等。
3.3 潔凈度 cleanliness
潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑的懸浮粒子的允許統(tǒng)計(jì)數(shù)。
3.4 菌落 colony forming unist
細(xì)菌培養(yǎng)后，由一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的一細(xì)菌集落，簡稱CFU。通常用個(gè)數(shù)表示。
3.5 沉降菌 settling microbe
用本標(biāo)準(zhǔn)提及的方法收集到的活微生物粒子，通過的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。
3.6 懸浮粒子 ailborne Paritical
可懸浮在空氣中的尺寸一般在0.001μm～1 000μm之間的固體、液體或兩者的混合物質(zhì)，包括生物性粒和非生物性粒子。
3.7 單向流unidirectional air flow（曾稱為層流laminar flow）
沿著平行流線，以單一通路以一定流速向單一方向流動的氣流。
3.8 非單向流nonunidirectional air flow（曾稱為亂流turbulent flow）
具有多個(gè)通路循環(huán)特性或氣流方向不平行的，不滿足單向流定義的氣流。
3.9 靜態(tài)測試 at—rest test
潔凈室（區(qū)）凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已處于正常運(yùn)行狀態(tài)，工藝設(shè)備已安裝，潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的情況下進(jìn)行的測試。
3.10 動態(tài)測試 operational test
潔凈室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行的測試。
4 測試方法
4.1 方法概述
本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。
4.2 所用的儀器和設(shè)備
4.2.1 高壓消毒鍋
使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說明書操作。
4.2.2 恒溫培養(yǎng)箱
必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。
4.2.3 培養(yǎng)皿
一般采用Æ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。
4.2.4 培養(yǎng)基
普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認(rèn)可的培養(yǎng)基。其配制方法見附錄A（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。
4.3 測試步驟
4.3.1 采樣方法
將已制備好的培養(yǎng)皿按5.4.1.2的要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。
4.3.2 培養(yǎng)
4.3.2.1 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.3.2.2 在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于48h。
4.3.2.3 每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
4.3.3 菌落計(jì)數(shù)
4.3.3.1 用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5～10倍放大鏡檢查，不否遺漏。
4.3.3.2 若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2 個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。
4.4 注意事項(xiàng)
4.4.1 測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
4.4.2 采取一切措施防止人為對樣本的污染。
4.4.3 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。
4.4.4 由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉定物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。
4.4.5 采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
5 測試規(guī)則
5.1 測試狀態(tài)
5.1.1 沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。
5.1.2 沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。
5.1.3 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測試狀態(tài)。
5.2 測試人員
5.2.1 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。
5.2.2 靜態(tài)測試時(shí)，室內(nèi)測試人員不得多于二人。
5.3 測試時(shí)間
5.3.1 對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開始。
5.3.2 對非單向流，如10 000級、100 000級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開始。
5.4 沉降菌計(jì)數(shù)
5.4.1 采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置
5.4.1.1 zui少采樣點(diǎn)數(shù)目
沉降法的zui少采樣點(diǎn)數(shù)可按表1確定。
表1 zui少采樣點(diǎn)數(shù)目
面 積 m2 | 潔 凈 度 級 別 |
100 | 10 000 | 100 000 |
<10 | 2～3 | 2 | 2 |
≥～<20 | 4 | 2 | 2 |
≥～<40 | 8 | 2 | 2 |
≥40～<100 | 16 | 4 | 2 |
≥100～<200 | 40 | 10 | 3 |
≥200～<400 | 80 | 20 | 6 |
≥400～<1000 | 160 | 40 | 13 |
≥1 000～<2 000 | 400 | 100 | 32 |
2000 | 800 | 200 | 63 |
注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風(fēng)面面積，對非單向流潔凈室是指的房間面積。 |
在滿足zui少測點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足zui少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。
表2 zui少培養(yǎng)皿數(shù)
潔凈度級別 | 所需Æ90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降0.5h 計(jì)） |
100 | 14 2 2 |
10 000 |
100 000 |
5.4.1.2 采樣點(diǎn)的布置
采樣點(diǎn)的位置可以同懸浮粒子測試點(diǎn)。
a）工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
b）可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點(diǎn)。
采樣點(diǎn)位置的詳細(xì)規(guī)則見附錄B（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。
5.5 記錄
測試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。
測試報(bào)告的編寫見附錄C（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。
5.6 結(jié)果計(jì)算
5.6.1 用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
5.6.2 平均菌落數(shù)的計(jì)算，見式（1）。
平均菌落數(shù)M= ……………（1）
式中：M——平均菌落數(shù)；
M1——1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
M2——2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
Mn——n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
n——培養(yǎng)皿總數(shù)。
5.7 結(jié)果評定
用平均菌落數(shù)判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。
5.7.1 潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標(biāo)準(zhǔn)。
5.7.2 若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過評定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對此區(qū)域*行消毒，然后重新采樣兩次，測試結(jié)果均須合格。
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