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技術(shù)文章

56kD核蛋白抗體自身抗原

閱讀：761發(fā)布時間：2012-8-4

l．定義 56kD蛋白是大核糖核酸蛋白（InRNP）顆粒的成分之一。hRNP中的主要成分是富含脲嘧啶的小核糖核酸（snRNP），如U1、U2、U4／U6及U5snRNPs，其相應(yīng)的自身抗體見于一些自身免疫性疾病。56kD蛋白序列是高度保守的、存在于轉(zhuǎn)錄、合成活躍的各種組織細(xì)胞中。

2．來源 由于細(xì)胞內(nèi)存在大量豐富的InRNP顆粒，因而56kD蛋白來源豐富。以細(xì)胞核提取物進行蛋白質(zhì)印跡（免疫印跡），可檢測到肌炎患者血清中的56kD抗體。一些肌炎患者血清中通常僅含56kD抗體。

3．純化方法 采用免疫親和層析，可從富含InRNP的Hela細(xì)胞、Hep—2細(xì)胞核等提取物中純化56kD蛋白。用于純化56kD抗原的自身抗體可從56kD抗體陽性血清中制備。簡要的步驟是用飽和硫酸銨沉淀血清蛋白，過DE52層析柱，獲得的IgG與Sepharose 4B偶聯(lián)制成親和層析柱。核提取物溶于10mM Tris HCl pH7．9，0．5M NaCl，2mMPMSF中，上柱并用上述緩沖液充分洗滌，zui后改用0．2M醋酸洗脫蛋白，用1MK2HP04中和獲得的蛋白，用蛋白質(zhì)印跡法鑒定。
 


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