用 途：

GA  ELISA試劑盒用于植物提取液GA 。本試劑盒可以檢測天然和重組的GA 。

本試劑盒于科研、而非用于臨床診斷。

試驗(yàn)原理：

GA 試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知GA 濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將GA 和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中GA 的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1． 此試劑盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV為陰性，但沒有實(shí)驗(yàn)室可*保證此血制品不會傳染肝炎、AIDS或其它傳染病，依據(jù)當(dāng)?shù)氐陌踩珬l例處理本試劑盒里的成份及血清和血漿等樣品。

2． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

3． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

4． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項(xiàng)

1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

9． 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

試劑的準(zhǔn)備

1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。

4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作四次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育15分鐘。避免光照。

8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實(shí)驗(yàn)方案

結(jié)果分析

以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的GA 標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的GA 含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

局限

6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能

1． 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2． 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3． 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。