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技術(shù)文章

細(xì)胞活力鑒定——臺盼藍(lán)染色法

閱讀:2747發(fā)布時間:2010-7-31

原理:
細(xì)胞損傷或死亡時,臺盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜,與解體的DNA 結(jié)合,使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進入細(xì)胞內(nèi)。故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。

用品:
1. 4%
臺盼藍(lán)母液:稱取4g臺盼藍(lán),加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。
2.
吸管、*、顯微鏡

步驟:
1
、制備單細(xì)胞懸液。并作適當(dāng)稀釋(106 細(xì)胞/ml
2
、染色:細(xì)胞懸液與0.4%臺盼藍(lán)溶液以9:1混合混勻。
3
、計數(shù):在三分鐘內(nèi),用計數(shù)板分別計數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞

結(jié)果統(tǒng)計:
鏡下觀察,死細(xì)胞被染成淡藍(lán)色,而活細(xì)胞拒染。
根據(jù)下式求細(xì)胞活力:
活細(xì)胞率(%= 活細(xì)胞總數(shù)/(活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù))×100

注意事項:臺盼藍(lán)染細(xì)胞時,時間不宜過長。否則,部分活細(xì)胞也會著色,會干擾計數(shù)。

 

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