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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：442發(fā)布時間：2014-02-04
上海酶聯(lián)生物研究所
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試驗原理：
AFP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知AFP濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將AFP和*標記的抗體同時溫育。人甲胎蛋白ELISA 檢測試劑盒洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中AFP的濃度呈比例關系。
自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。人甲胎蛋白ELISA 檢測試劑盒底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致，ELISA 檢測試劑盒以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。
洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的AFP標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的AFP含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍：0-400ug/L
4、敏感度： 1.0 ug/L
Y160540 Anti-WBSCR14/ChREBP /FITC 熒光素標記糖類應答元件結合蛋白ChREBP抗體IgG 0.2ml
Y160541 Anti-CD64/PE 熒光素PE標記免疫球蛋白G Fc段受體I 0.2ml
Y160542 Anti-CD184/CXC-R4/PE 熒光素PE標記細胞表面趨化因子受體4抗體IgG 0.2ml
Y160543 Anti-Annexin V/PE 熒光素PE標記兔抗人、大、小鼠、牛Annexin V抗體IgG 0.2ml
Y160544 Anti-factor VIII/PE 熒光素PE標記第八因子相關抗原抗體IgG 0.2ml
Y160545 Anti-VWF/PE 熒光素PE標記血管性血友病因子抗體IgG 0.2ml
Y160546 Anti-CD8/PE 熒光素藻紅蛋白標記兔抗人、大、小鼠CD8抗體IgG 0.2ml
Y160547 Anti-TRF/Gold 金離子標記抗轉鐵蛋白抗體IgG 0.5ml(15nm)
Y160548 Anti-PSA ELISA 檢測試劑盒/Gold 膠體金離子標記抗鼠抗人前列腺特異性抗原單克隆抗體(檢測)IgG 0.2ml
Y160549 人甲胎蛋白ELISA 檢測試劑盒Anti- Beta-HCG/Gold 膠體金離子標記小鼠抗人β亞基人絨毛膜*單抗IgG 0.2ml
Y160550 Anti- Alpha -HCG/Gold 膠體金離子α 亞基人絨毛膜*單抗 IgG 0.2ml
Y160551 Anti-CD167a(DDR1)/HRP 辣根過氧化物酶標記CD167a抗體IgG 0.2ml
Y160552 Anti-GST-Tag/Biotin *標記兔抗重組*轉移酶GST標簽蛋白抗體IgG 0.2ml
Y160553 Anti-CEA/Biotin *化鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體（檢測）IgG 0.2ml
商鋪：http://www.hg1112.cn/st32881/
主營產(chǎn)品：ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒，植物ELISA試劑盒
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