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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：570發(fā)布時間：2011-05-04
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免疫組化（IHC）基本原理：
免疫組化是應(yīng)用免疫學基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應(yīng)使標記抗體的顯色劑 （熒光素、酶、金屬離子、同位素） 顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(shù)（immunohistochemistry）或免疫細胞化學技術(shù)（immunocytochemistry）。
*，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細胞中的某些化學物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（*抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或*等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細胞或組織中的化學成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進行檢測。
免疫組織化學技術(shù)按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
用于病理診斷的主要有免疫熒光法和免疫酶法。免疫熒光法是現(xiàn)代生物學和醫(yī)學中廣泛應(yīng)用的方法之一，包括熒光抗體和熒光抗原技術(shù)，具有抗原抗體反應(yīng)的特異性，染色技術(shù)的快速性，在細胞或組織上定位的準確性，以及熒光效應(yīng)的靈敏性等優(yōu)勢。但是，由于免疫熒光法必須具有熒光顯微鏡，熒光強度隨時間的延長而逐漸消退，結(jié)果不易長期保存等缺點，在普及應(yīng)用上受到一定限制，而逐漸被免疫酶法所取代。
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