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上海酶聯(lián)生物研究所


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293和293T的區(qū)別以及培養(yǎng)條件

閱讀：2045發(fā)布時(shí)間：2011-04-18

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1、來源：293細(xì)胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞系，293T細(xì)胞由293細(xì)胞派生，同時(shí)表達(dá)SV40大T抗原，含有SV40復(fù)制起始點(diǎn)與啟動(dòng)子區(qū)的質(zhì)粒可以復(fù)制。用Ca3（PO4）2轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50%。蛋白表達(dá)水平高，轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較 容易地檢測(cè)到表達(dá)的蛋白。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞是過表達(dá)蛋白并獲得細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。

2、形態(tài)為上皮細(xì)胞，貼壁細(xì)胞，能致瘤。

3、染色體核型：亞三倍體人細(xì)胞系。染色體眾數(shù)為64，30%的細(xì)胞有64 條染色體。4.2%的細(xì)胞染色體數(shù)目更多。多數(shù)細(xì)胞der（1）t（1;15） （q42;q13）, der（19）t（3;19） （q12;q13）, der（12）t（8;12） （q22;p13）,還有四條標(biāo)記染色體，有的細(xì)胞另有5條標(biāo)記染色體。der（1）與M8 （or Xq+）常常成對(duì)出現(xiàn)。N17 與 N22各有四條。值得注意的是多數(shù)細(xì)胞有三條X染色體，兩條Xq+，一條Xp+。

4、293細(xì)胞系是原代人胚腎細(xì)胞轉(zhuǎn)染5型腺病毒（Ad 5） DNA的永生化細(xì)胞。表達(dá)轉(zhuǎn)染的腺病毒5的基因。早期報(bào)道認(rèn)為此細(xì)胞含有Ad 5基因組左端和右端[RF32764]，現(xiàn)已清楚僅含有左端序列，此細(xì)胞系人腺病毒滴度高。室溫不貼壁，37℃幾日后重新貼壁。表達(dá)由整合素beta-1 亞基與玻基結(jié)合素受體 alpha-v 亞基組成的?；Y(jié)合素細(xì)胞表面受體。

5、293:棄培養(yǎng)基，含0.25% *, 0.03% EDTA 消化液洗滌，棄去，加1-2ml消化液室溫或37℃消化。加入新鮮培養(yǎng)基，吸出，分到新培養(yǎng)皿中。一傳二至一傳四。

293T:生長(zhǎng)快，通常倍增時(shí)間不到一 天 。每3~4 天1：10至1：20稀釋，5% CO2條件下培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁疏松，可只用EDTA消化，不要用*過度消化。

每?jī)傻饺鞊Q 液一次。

6、凍存液：95%培養(yǎng)基；5%,DMSO；

7、培養(yǎng)條件：ATCC培養(yǎng)基：90%的MEM Eagle，加入2mM L-*，1.5g/L*，0.1 mM必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸鈉；10%加熱滅活的馬血清37℃培養(yǎng)。
 


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