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技術(shù)文章

精漿水平檢測方法

閱讀:25發(fā)布時間:2022-9-21

  輔酶Q10又稱泛醌,是一種重要的脂溶性物質(zhì),存在于以人類為主的動、植物線粒體的內(nèi)膜中,在呼吸鏈中起著傳遞氫體作用。它對許多酶具有激活作用,并能增加機(jī)體的免疫力。Co Q10同時也是機(jī)體內(nèi)一種重要的抗氧化物質(zhì),具有天然的抗自由基氧化,防止細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、保持膜流動性的功能。正是由于Co Q10的這種抗氧化特性,使其愈來愈引起人們的關(guān)注,臨床應(yīng)用范圍不斷得到擴(kuò)大。

  測定Co Q10的方法已有文獻(xiàn)報道,其中主要采取分光光度法。這些方法的靈敏度和特異性都不夠理想。一般難于應(yīng)用于生物樣品中微量Co Q10的測定。近年液相色譜分析方法已開始應(yīng)用于血漿生物樣品中Co Q10含量測定。

  可以輔酶Q9為內(nèi)標(biāo),建立了一種液相色譜內(nèi)標(biāo)法用于測定精漿中Co Q10含量。步驟簡便,準(zhǔn)確性、特異性較好。應(yīng)用本法研究正常生育男子和不育癥患者精漿中Co Q10含量差異,并對測定結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計學(xué)分析。

  方法色譜條件:流動相:異丙醇:甲醇;四氫呋喃(55396),使用前以0.45µm膜減壓過濾。檢測波長:275nm。流速:1.0ml/min。定量管體積20µL。

  樣品測定:于避光處移取精漿1.0mL置于10mL具塞尖底離心管中,加入60µLCo Q9內(nèi)標(biāo)溶液(5mg/L),搖勻。加入2ml甲醇,加蓋渦漩混合30s沉淀蛋白后加入5mL正己烷,渦漩混合提取5min,離心(3000r/min;5min)。取正己烷層4ml移至安瓿,45℃下以氮?dú)饬鞔蹈?。殘渣?/span>100 µL異丙醇充分溶解后,按上述色譜條件進(jìn)樣測定。


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