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技術文章

調(diào)整HPLC的流動相有哪些原則？

閱讀：42發(fā)布時間：2022-9-16

  液相色譜儀的流動相調(diào)整非常重要，一般來說，應該考慮以下方面。

  一 由強到弱。一般先用90%的乙腈/水進行試驗，這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑的比例。

  二 三倍規(guī)則。每減少10%的有機溶劑的量，保留因子約增加3倍，此為3倍規(guī)則。調(diào)整過程中，注意觀察各個峰的分離情況。

  三 粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)。當分離達到一定程度后，應將有機溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并根據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。

  四 液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此，要求流動相還必須具備如 下特點：

  1 流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中。

  2 流動相與樣品不產(chǎn)生化學反應。

  3 流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低壓降，延長泵的使用壽命。

  4 流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

  5 流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行。

  6 流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。


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