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技術(shù)文章

液相色譜法檢測人血漿中順式和反式異構(gòu)體

閱讀:53發(fā)布時間:2022-9-12

  為第二代類抗生素,具有廣譜抗菌作用。臨床用于治療敏感菌所致的輕、中度感染。中順式異構(gòu)體的含量在90%以上,而反式異構(gòu)體只占10%以下。順反式異構(gòu)體在化學(xué)穩(wěn)定性和抗革蘭陽性鏈球菌和葡萄球菌活性方面是相同的,但在抗革蘭陰性大腸埃希桿菌、肺炎克雷伯菌等方面,順式的抗菌活性是反式的68倍。

  可采用液相色譜同時測定人血漿中順式(Z)和反式(E)異構(gòu)體濃度。

  檢測所需儀器

  液相色譜儀,配有 工作站; 旋渦混合器; 高速臺式離心機。

  色譜條件

  色譜柱:(200×4.6 mm,5μm);流動相:0.05 mol/L溶液(磷酸調(diào)pH2.50-乙腈(8812);檢測波長:280nm;柱溫:30 ℃;流速:1.2 ml/min;進樣量:50μl

  測定方法

  1 精密量取血漿樣品500μl,加入內(nèi)標(100.2μg/ml50μl,20%三氯醋酸100μl,漩渦混合1分鐘,離心6分鐘,取上層液,依次加入乙腈0.5ml和二氯甲烷2ml,振蕩6分鐘,離心6分鐘,取上層液離心6分鐘,取50μl上清液進樣分析。

  2 精密量取空白血漿500μl,分別加入順式(Z)和反式(E)異構(gòu)體標準系列溶液各50μl,配制成血漿中順式(Z)異構(gòu)體濃度為0.1003,0.3008,1.0025,2.00504.0100,8.0200,16.0400μg/ml和反式(E)異構(gòu)體濃度為20.0,40.1,100.2,200.4,400.81002.0,1603.2ng/ml的血漿樣品,按“血漿樣品處理”項下自“加入內(nèi)標溶液”起同法試驗,以待測物濃度為橫坐標X,待測物與內(nèi)標物的峰面積比值(AS/Ai)為縱坐標Y,用加權(quán)zui小二乘法[2](權(quán)重系數(shù):1/X2)進行線性回歸運算,求得的線性回歸方程即為標準曲線方程。

 


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