（1）培養(yǎng)〖HT5SS〗
甲型流感病毒雖能引起人和多種動物的疾病,但大多數(shù)毒株具有比較明顯的宿主特異性.各型流感病毒都能在雞胚內(nèi)良好增殖.初代分離時應用羊膜腔接種法,但許多毒株也能適應于雞胚尿囊腔,特別是已在羊膜腔內(nèi)傳代的毒株.丙型流感病毒只能在羊膜腔內(nèi)增殖.多數(shù)流感病毒可在牛胚腎、雞胚腎、猴胚腎和人胚腎細胞內(nèi)增殖,但各毒株產(chǎn)生細胞病變的能力不同.檢測細胞培養(yǎng)物內(nèi)病毒增殖的zui可靠的方法是血細胞吸附試驗.流感病毒對細胞的吸附,發(fā)生于病毒血凝素與細胞受體（含神經(jīng)氨酸）之間.雖然病毒的NA也參與反應,但因其與HA相比,在數(shù)量上只占極少數(shù)（10∶1）,故在病毒與細胞的zui初吸附中起不到多大作用.據(jù)估計,每個雞胚絨毛尿囊膜細胞約有1000～2000個受體部位.
（2）病毒基因組的復制與轉(zhuǎn)錄
流感病毒復制時可產(chǎn)生兩種基因轉(zhuǎn)錄物：一種是A（+）cRNA,其功能相當于mRNA；另一種是A（－）cRNA,是病毒復制時產(chǎn)生vRNA的模板.病毒RNA在細胞內(nèi)zui先轉(zhuǎn)錄出mRNA（+）cRNA,這一過程稱初始轉(zhuǎn)錄.子代病毒RNA分子的產(chǎn)生稱為二級轉(zhuǎn)錄,這一過程是用A（－）cRNA作模板合成vRNA.流感病毒與其它RNA病毒（如小RNA病毒）不同,它不能在去核的細胞內(nèi)復制,而且紫外線照射、*或絲裂酶素C都可以阻斷病毒的增殖.上述藥物只能在RNA合成之前,即感染后前2小時之內(nèi)有此作用.但是DNA合成的化學抑制物（如阿糖胞苷～AraC）,不能降低感染病毒的增殖.因此,功能性宿主DNA,而不是復制型宿主DNA,是流感病毒增殖的早期過程所必需的.實際上,宿主細胞的mRNA對流感病毒RNA的復制和轉(zhuǎn)錄也是需要的,因為宿主細胞mRNA的5’端10～15個核苷酸以及其帽子結(jié)構(gòu),可轉(zhuǎn)移到病毒裸露mRNA的5’端,也可作為病毒基因組轉(zhuǎn)錄的引物.證明流感病毒的復制需要宿主細胞RNA多聚酶的參與.
流感病毒的初始轉(zhuǎn)錄,流感病毒的初始轉(zhuǎn)錄（mRNA的合成）包括引物RNA的切割、合成啟始、鏈的延長和終止等幾個過程,由病毒轉(zhuǎn)錄酶復合體（包括PB1、PB2、PA和NP）來完成.首先,病毒核酸酶PB2結(jié)合到宿主mRNA的5’端并切下10～13個核苷酸,這一序列帶有帽子結(jié)構(gòu),可直接作為引物.一般的核酸酶切割后產(chǎn)生的3’端帶有磷酸,而流感病毒的核酸內(nèi)切酶切割后可產(chǎn)生3’端OH基,因此切下的寡核苷酸不需要去磷酸化即可直接作引物.流感病毒核酸內(nèi)切酶作用的發(fā)揮要求帽子上有m7G,其合適的切割位點在嘌呤的3’端,并且距離是10～13個核苷酸,zui適切割位點是腺嘌呤核苷的3’端.引物加上后,PB1以病毒RNA為模板催化合成的起始和鏈和延伸.加上去的*個核苷酸是G,它與病毒RNA3’端的第二個核苷酸互補,由此可見,病毒轉(zhuǎn)錄酶不轉(zhuǎn)錄3’端*個核苷酸（U）.當鏈延伸到11－15個核苷酸長度時,引物從PB2上釋放下來,但其3’端的A仍保留在mRNA上,因此病毒mRNA的5’端仍為AGC.在鏈的延伸過程中,PB1、PB2和PA一起移動,但PA的作用還不清楚.當鏈延伸到距模板5’端15～22個核苷酸處時遇到寡聚U序列,以此為模板合成PolyA尾后使鏈的延長終止.由此可見病毒mRNA是病毒RNA的不*轉(zhuǎn)錄物.
（A）（一）cRNA的合成及病毒基因組復制,（A）（一）cRNA是合成子代病毒基因組的模板,可在感染的宿主細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn),它是病毒RNA的*轉(zhuǎn)錄物,5’末端是pppA,3’端沒有PolyA尾.流感病毒mRNA的合成在無病毒蛋白質(zhì)合成的情況下即可進行,而（A）（一）cRNA不同,必須在有功能性病毒蛋白合成后才能進行,因此其合成出現(xiàn)的時間比mRNA晚.一般認為合成（A）（一）cRNA所需要的酶也是病毒聚合酶復合體,但病毒的某些蛋白質(zhì)（如NS1、NS2和M2）也參與這一轉(zhuǎn)錄過程.其轉(zhuǎn)錄的特點是不需要引物即可起始；轉(zhuǎn)錄時由于病毒蛋白質(zhì)的參與,能通過模板上的PolyU區(qū)到達5’末端.病毒聚合酶復合體中每種成分在轉(zhuǎn)錄過程中的作用還不十分清楚.流感病毒8個片段或7個片段的末端序列都相同,因此轉(zhuǎn)錄酶識別每個片段的機會是均等的,這樣每個片段轉(zhuǎn)錄（A）（一）cRNA率都相同.（A）（一）cRNA合成后可作為模板,在轉(zhuǎn)錄酶復合體的催化下忠實地轉(zhuǎn)錄出子代病毒RNA.
RNA合成的調(diào)節(jié),在流感病毒感染過程中,三種病毒RNA［mRNA、（A）（一）cRNA和vRNA］的合成速度受到某種機制的調(diào)節(jié).感染后zui先合成的是mRNA,幾乎在感染后馬上就能檢測到,因為mRNA的合成只需要病毒多聚酶復合體及宿主mRNA的帽狀結(jié)構(gòu),不需要其它的病毒蛋白質(zhì)的協(xié)助.mRNA的合成在感染后2小時可達到高峰.在檢測到mRNA后很快即可檢測到（A）（一）cRNA,不過其合成高峰出現(xiàn)的時間可能比mRNA的還早.（A）（一）cRNA合成后很快復制出vRNA.
（3）病毒的增殖、吸附、穿膜和脫殼
〖HT5SS〗流感病毒與其它病毒一樣,感染的*步是病毒與細胞上的特異受體相互作用,使病毒吸附于細胞表面.流感病毒的受體結(jié)合位點位于HA頭部頂端,細胞受體是位于細胞膜糖蛋白或糖脂鏈末端的唾液酸.吸附后病毒粒子經(jīng)吞飲作用進入細胞漿,與酸性溶酶體發(fā)生融合,這樣可使流感病毒周圍的pH下降到50.在這種酸性環(huán)境中,HA的構(gòu)型發(fā)生很大變化,使HA2的氨基端游離出來并插入吞噬泡膜的脂質(zhì)雙層,促使病毒囊膜與吞噬泡膜融合并破裂,zui后病毒核衣殼釋放到細胞漿內(nèi).病毒基因組的復制及其它成分的合成,流感病毒基因組為負鏈RNA,就是說病毒基因組RNA不能作為模板翻譯蛋白質(zhì),必須首先合成mRNA才能進行蛋白質(zhì)的合成.因此病毒脫去囊膜后其核酸片段進入宿主細胞核,在病毒本身攜帶的聚合酶復合體催化下,以宿主細胞mRNA5’端序列作引物開始初級轉(zhuǎn)錄,即產(chǎn)生mRNA.產(chǎn)生的病毒mRNA進入細胞質(zhì)用于翻譯病毒蛋白質(zhì).在感染的初期,產(chǎn)生的蛋白質(zhì)主要是NP和NS1,這時宿主細胞mRNA的翻譯被阻斷,新合成的NP和NS1又進入細胞核,當在核內(nèi)聚集到一定濃度后,使病毒mRNA的合成速度下降,開始A（一）cRNA和vRNA的合成.新合成的vRNA在核內(nèi)與NP組成復合體,又可作為模板轉(zhuǎn)錄病毒mRNA.流感病毒的糖成分主要存在于囊膜上,是糖蛋白和糖脂的組分.糖脂成分來源于宿主細胞,糖蛋白中的寡糖側(cè)鏈由宿主細胞的轉(zhuǎn)移酶合成.病毒囊膜的類脂成分也來源于宿主細胞膜.病毒粒子的裝配,有關(guān)流感病毒粒子的詳細裝配過程目前還不清楚.一般認為NP在細胞漿合成首先以游離狀態(tài)存在,但很快進入細胞核與vRNA結(jié)合形成核殼體.zui近研究表明,M1在細胞核內(nèi)聚集到一定程度可促使核殼體從細胞核進入細胞質(zhì).基因組片段被NP包圍后可形成一種串聯(lián)結(jié)構(gòu),但其形成機制還不清楚,因為每一片段的末端序列都相同,在不同片段之間很難找到配對序列.有人認為NP之間的相互作用可將它們聯(lián)在一起,但是還沒有直接證據(jù).基質(zhì)蛋白（M1）合成后到達細胞膜,緊貼在細胞膜內(nèi)側(cè)面,在此處的胞膜上有HA和NA形成的纖突.核衣殼形成后移向這一區(qū)域準備出芽.在每一個感染性病毒粒子中都含有8個或7個不同的基因組片段,在病毒裝配過程中如何只包裝8個或7個不同的片段而不出現(xiàn)差錯,目前還是一個懸而未決的問題.病毒的出芽和釋放,M1合成后到達細胞膜,與HA、NA或M2的胞漿域之間相互作用可能是病毒出芽的信號.病毒釋放過程中NA起很重要的作用.NA可去掉病毒囊膜上的神經(jīng)氨酸,避免子代病毒在細胞膜上聚集.病毒成熟的zui后一步是靠宿主的蛋白酶將HA裂解為HA1和HA2,使病毒粒子具有感染性.
