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技術(shù)文章

應(yīng)用親和素和*的ELISA

閱讀：385發(fā)布時間：2011-1-15

親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取，分子量為60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個*分子緊密結(jié)合?，F(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素（strepavidin）。*（biotin）又稱維生素H，分子量244．31，存在于蛋黃中。用化學(xué)方法制成的衍生物，*-羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide ester，BNHS）可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成*化的產(chǎn)物。親和素與*的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，但特異性強，親和力大，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個親和素分子有4個*分子的結(jié)合位點，形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親和素和*與ELISA耦聯(lián)起來，就可大大提高其靈敏度。

親和素*系統(tǒng)在ELISA中的應(yīng)用有多種形式，可用于間接包被，亦可用于終反應(yīng)放大?？梢栽诠滔嗌舷阮A(yù)包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與*結(jié)合，通過親和素*反應(yīng)而使*化的抗體或抗原固相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且可使其結(jié)合點充分暴露。另外，在常規(guī)ELISA中的酶標(biāo)記抗體也可用*化的抗體替代，然后連接親和素與酶的結(jié)合物，以放大反應(yīng)信號。橋聯(lián)法（avidin biotin complex-ELISA，ABC-ELISA）與夾心法測抗原的過程見圖。

 


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