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雜交瘤細胞的凍存與復蘇

閱讀：713發(fā)布時間：2010-12-25

1．雜交瘤細胞的凍存 及時凍存原始孔的雜交瘤細胞每次克隆化得到的亞克隆細胞是十分重要的。因為在沒有建立一個穩(wěn)定分泌抗體的細胞系時，細胞培養(yǎng)過程中隨時可能發(fā)生細胞的污染、分泌抗體能力的喪失等等。如果沒有原始細胞．的凍存，則可因上述意外而前功盡棄。雜交瘤細胞的凍存方法同其他細胞系一樣，原則上海支安瓿含1×106個以上個細胞，但對原始孔的雜交瘤細胞可以因培養(yǎng)環(huán)境不同而改變，在24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)，當長滿孔底時，1孔就可以裝1支安瓿凍存。細胞凍存液為50％小牛血清、40％不*培養(yǎng)液、10％DMSO。凍存液預冷，操作動作輕柔、迅速。凍存時從室溫降至0℃后放人一70℃超低溫冰箱，次日轉入液氮中。也可用細胞凍存裝置進行凍存。凍存細胞要定期復蘇，檢查細胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性，在液氮中細胞可保存數年或更長時間。

2．細胞復蘇方法 將玻璃安瓿自液氮中小心取出，放37℃水浴中，在Irain內使凍存的細胞解凍，將細胞用*培養(yǎng)液洗滌兩次，然后移人前一天已制備好的飼養(yǎng)層細胞的培養(yǎng)瓶內，置37℃、5％C02孵箱中培養(yǎng)，當細胞形成集落時，檢測抗體活性。

 


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