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上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司
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Western Blot，大名蛋白免疫印跡，小名“西方雜交”。作為定性定量?jī)砂押檬?，毫不夸張地說，WB 可以說是實(shí)驗(yàn)室人人必會(huì)的技能之一，但并非每人都能做出一張的曝光圖，宛若夜深的樓宇燈火闌珊。今天就教給新同學(xué)們新手WB避坑指南，避開那些容易出現(xiàn)的問題，讓你以后的WB曝光圖賞心悅目，小伙伴十人九慕，導(dǎo)師贊不絕口。
問題一：有些同學(xué)的WB圖，一大塊黑色，找條帶全靠猜。
這種情況原因有三：
1.封閉不充分
除了生物素標(biāo)記的抗體需要使用 0.5%-2% 的 BSA 封閉，建議大部分蛋白用 5% 脫脂奶粉在 4℃ 條件下過夜封閉。
2.洗膜不*
需用新配制 1xTBST 快速洗膜，每 5 分鐘更換新液，循環(huán) 3-4 次。
3.顯色液靈敏度過高
注意有些靈敏度過高的顯色液需要要稀釋后使用，否則會(huì)影響曝光。
問題二：白雪皚皚，同學(xué)們的心都涼透了，造成這種成像的原因是？
這種情況原因有三：
1.陽性對(duì)照必須加
定性實(shí)驗(yàn)里，如果沒有出現(xiàn)你要的條帶，你需要一次陽性對(duì)照來證明，不是操作或者抗體有問題，是條帶真沒有。
2.抗體有無加錯(cuò)
加抗體之前一定要確認(rèn)種類，不然你用羊抗豬的抗體去雜鼠抗，當(dāng)然會(huì)雜不出來。
3.抗體失效
有這個(gè)可能性但較小，*的方法就是使用那些被師兄師姐證明質(zhì)量過硬的抗體啦。推薦使用使用*、高質(zhì)量的抗體，記得關(guān)注售后服務(wù)哦。
問題三：有時(shí)候我們會(huì)發(fā)現(xiàn)所有的條帶都太淺，同預(yù)期相差甚遠(yuǎn)，這種情況要怎么改善呢？
這種情況原因有二：
1.顯色液過少或者反應(yīng)時(shí)間不足
顯色液的使用方法嚴(yán)格按照說明書要求。
2.抗體濃度
雖然抗體都有推薦使用濃度，有時(shí)也需要提高濃度才能使條帶清晰呈現(xiàn)。
勁馬擁有一批技術(shù)、經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)工程師，經(jīng)過多年積累，試劑盒現(xiàn)已涵蓋種屬甚多，上千余種指標(biāo)，有快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，迎合了廣大高校和科研人員的需求，極大的提高了科研人員的工作效率，成熟穩(wěn)定的質(zhì)量，贏得了眾多科研機(jī)構(gòu)的認(rèn)可，完善的庫存及供應(yīng)體系以及穩(wěn)定的技術(shù)指導(dǎo)，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)。有技術(shù)問題歡迎lai電咨詢！
