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一年一度的高考來(lái)了，無(wú)論您家今年有沒有考生，我們都清楚的知道高考對(duì)于學(xué)子們的重要意義！上海勁馬在此祝愿學(xué)子們?cè)诟呖贾衅扉_得勝！一鳴驚人！金榜題名！今天勁馬小編將帶您了解CK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的注意事項(xiàng)和常見問(wèn)題歸納！讓您關(guān)注高考與掌握試劑常見問(wèn)題兩不誤！
注意事項(xiàng)：
1.酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾，可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
2.CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響結(jié)果。
3.當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)板zui外一圈的孔zui容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下，zui外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用。
4.在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮藥物的吸收，可在加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450nm的吸光度作為空白對(duì)照。
5.金屬對(duì)CCK8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1 mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)抑制5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10 mM的話，將會(huì)100%抑制。
6.懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。
常見問(wèn)題歸納：
1：CCK的保存和穩(wěn)定性如何？
答：CCK穩(wěn)定性高，避光條件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。經(jīng)常使用建議4℃保存，避免反復(fù)凍融。CCK正常顏色為粉紅色，若顏色發(fā)生明顯偏差，質(zhì)量可能有發(fā)生變化。
2：CCK的細(xì)胞毒性如何？
答：CCK毒性非常低，因此CCK檢測(cè)完后相同的細(xì)胞還能用于其它細(xì)胞增殖檢測(cè)如結(jié)晶紫染色法，中性紅染色法或DNA熒光染色法。
3：CCK會(huì)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色嗎？
答：不會(huì)，首先WST-8不會(huì)進(jìn)入細(xì)胞染色，整個(gè)顯色反應(yīng)都是在培養(yǎng)體系中進(jìn)行的。另外WST和WST-8甲臜都屬于高度水溶性組分，反應(yīng)結(jié)束更換新的培養(yǎng)液，即可清除外源組分。
4：做細(xì)胞活性檢測(cè)時(shí)，每孔應(yīng)該接種多少個(gè)細(xì)胞？
答：當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的zui小接種量至少為1,000個(gè)/孔(100 μL培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500個(gè)/孔(100 μL培養(yǎng)基)。
5：在加入CCK-8時(shí)可否不更換培養(yǎng)基？
答：一般情況下可以不更換培養(yǎng)基。但是如果培養(yǎng)基里有氧化還原性物質(zhì)的話，有可能會(huì)產(chǎn)生誤差，必須更換其它培養(yǎng)基。
6：若是使用6孔或者24孔板進(jìn)行試驗(yàn)，CCK試劑使用量怎么樣呢？
答：如果要使用6孔板或24孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK溶液。
7：能否用384孔板進(jìn)行細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?br />答：可以，CCK-8產(chǎn)品的使用量為每孔培養(yǎng)基總體積的10%。建議先將CCK-8產(chǎn)品稀釋一倍，然后加入培養(yǎng)基總體積的20%即可，這樣可減少誤差。
8：只可以在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值嗎？
答：可以在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，但是若無(wú)此波長(zhǎng)的濾光片，可選擇吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測(cè)靈敏度高。
9：若是暫不檢測(cè)OD值，該如何處理？
答：若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化
10：在實(shí)驗(yàn)中OD值太高，怎么解決？
答：可以縮短加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。例如：可以把加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間由2小時(shí)縮短為1小時(shí)。此外，可適當(dāng)減少細(xì)胞的數(shù)量。
11：如果OD值太低，怎么解決？
答：可以采取2個(gè)辦法：1、適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量 2、延長(zhǎng)加入CCK-8試劑后的反應(yīng)時(shí)間。
12：應(yīng)該每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎？
答：建議每次做。雖然細(xì)胞是一樣的，但是細(xì)胞的狀態(tài)不一定一樣。對(duì)于狀態(tài)不一樣的細(xì)胞，建議每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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