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一氧化氮（NO）試劑盒說明書
硝酸還原酶法
一、實(shí)驗(yàn)儀器：
試管、微量移液器、旋渦混勻器、離心機(jī)、37°C 恒溫水浴鍋，可見分光光度計(jì)（550nm） 二、適用范圍：
本試劑盒可測血清、血漿、培養(yǎng)細(xì)胞、培養(yǎng)液及動植物組織樣本中 NO 含量 三、測定意義：
一氧化氮( NO )是近年來生命科學(xué)研究領(lǐng)域中zui熱點(diǎn)課題之一，與心血管、神經(jīng)、胃腸、泌尿、
免疫系統(tǒng)、腎病、肝病、糖尿病、腫瘤、創(chuàng)傷、感染、器管移植排斥反應(yīng)和性功能調(diào)控等都有密切關(guān) 系。NO是一種新的免疫分子和炎癥介質(zhì)、介導(dǎo)內(nèi)毒素、TNF、IL-1β、IL-6 等細(xì)胞因子的病理作用。
- - - - - -
NO化學(xué)性質(zhì)活潑，體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽(NO2 )和硝酸鹽(NO3 )，血清NO2 與NO3 濃度之和 (NO2 + NO3 )，
- -
才能準(zhǔn)確代表體內(nèi)NO水平。血清 (NO2 +NO3 ) 含量測定，國內(nèi)有的單位采用金屬鎘還原法，但該法操
- - -
作繁瑣 (血清需除蛋白)，反應(yīng)不易控制 (金屬鎘可將NO2 進(jìn)一步還原)，且不能完全將NO3 還原為NO2 ，
準(zhǔn)確性差。 四、操作表：
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
雙 蒸 水 (ml) | 0.1 |
|
|
100μmol/L 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 (ml) |
| 0.1 |
|
樣本 (ml) |
|
| 0.1 |
試劑一 (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
試劑二 (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
混勻，37℃準(zhǔn)確水浴 60 分鐘
試劑三 (ml) | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
試劑四 (ml) | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
充分旋渦混勻 30 秒，室溫靜置 10 分鐘，3500～4000 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清顯色。
上清(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
顯色劑 (ml) | 0.6 | 0.6 | 0.6 |
混勻，室溫靜置 10 分鐘，蒸餾水調(diào)零，550nm，0.5cm 光徑,測各管吸光度值。
五、計(jì)算公式：
1、血清(漿)中 NO 含量計(jì)算公式：
NO含量
測定OD值 − 空白OD值 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 樣品測試前
= × ×
(μ mol / L)
標(biāo)準(zhǔn)OD值 − 空白OD值
(100μ mol / L)
稀釋倍數(shù)
2、組織樣本中 NO 含量計(jì)算公式
NO含量
測定OD值 − 空白OD值
= ×
標(biāo)準(zhǔn)品濃度
待測樣本蛋白濃度
÷
(μ mol / gprot*)
標(biāo)準(zhǔn)OD值 − 空白OD值
(20μ mol / L * *) ( gprot / L)
