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熒光定量PCR系列問題之無Ct值(信號)出現(xiàn)

2015-5-28  閱讀(16754)

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熒光定量PCR系列問題之無Ct值(信號)出現(xiàn)有以下幾種可能原因及解決方法解析:歡迎閱讀參考。    
反應(yīng)循環(huán)數(shù)不夠    
一般都要在35個循環(huán)以上,可根據(jù)實驗情況增加循環(huán)(如至45循環(huán)), 但高于45個循環(huán)會增加過多的背景信號
檢測熒光信號的步驟有誤    
一般SG法采用72℃延伸時采集,Taqman法則一般在退火結(jié)束時或延伸結(jié)束采集信號
引物或探針降解    
可通過PAGE電泳檢測其完整性
模板量不足    
對未知濃度的樣品應(yīng)從系列稀釋樣本的zui高濃度做起
模板降解    
避免樣品制備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況發(fā)生
目的基因在組織中不表達(dá)或者表達(dá)量低    
嘗試其它組織

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