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Human Brain Derived Neurotrophic
Facor（BDNF） ELISA Kit
 
 
 
 
Catalog No. CSB-E04501h
（96 tests）
 
 
 
 
 
  This immunoassay kit allows for the in vitro quantitative determination of human
BDNF concentrations in serum, plasma and other biological fluids.
  Expiration date      six months from the date of manufacture
  FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
 
 
 
 
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INTRODUCTION
BDNF  is  a  13  kDa,  119  amino  acid  （aa）  residue  non-glycosylated
polypeptide whose  primary  structure  is  conserved  among  all mammalian
species examined. Initially synthesized as a 247 aa residue prepropeptide,
the BDNF molecule is divided into an 18 aa residue signal sequence, a 110
aa residue prosequence, and a 119 aa residue mature segment. Similar to
other  neurotrophic  factors,  there  is  a  possibility  that  the  N-terminus  is
alternatively  spliced,  giving  rise  to a  longer pre-prosegment  （but  identical
mature segment） with different functional properties. As a mature molecule,
BDNF  is  52%  identical  to  NGF  at  the  amino  acid  level,  exists  as  a
noncovalently-linked  homodimer  in  solution,  and  contains  six  cysteine
residues that are believed to form three intrachain disulfide linkages. BDNF
in plasma is detected in the pg/mL  
PRINCIPLE OF THE ASSAY
The  microtiter  plate  provided  in  this  kit  has  been  pre-coated  with  an
antibody  specific  to BDNF. Standards  or  samples  are  then  added  to  the
appropriate  microtiter  plate  wells  with  a  Horseradish  Peroxidase  （HRP）
-conjugated  antibody  preparation  specific  for BDNF  and  incubated.  Then
substrate solutions are added to each well. The enzyme-substrate reaction
is  terminated  by  the  addition  of  a  sulphuric  acid  solution  and  the  color
change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2
nm.  The  concentration  of  BDNF  in  the  samples  is  then  determined  by
comparing the O.D. of the samples to the standard curve. 
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DETECTION RANGE
0.62  ng/ml-20  ng/ml.  The  standard  curve  concentrations  used  for  the
ELISA’s were 20 ng/ml, 10 ng/ml, 4.37 ng/ml,1.87 ng/ml, 0.62ng/ml.
SPECIFICITY
This  assay  recognizes  human  BDNF.  No  significant  cross-reactivity  or
interference was observed.
SENSITIVITY
The minimum detectable dose of human BDNF  is  typically  less  than 0.31
ng/ml.
The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection （LLD） was defined
as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero.
MATERIALS PROVIDED
Reagent      Quantity
Assay plate  1
Standard  5 x 0.5 ml
HRP-conjugate  1 x 6 ml
Substrate A  1 x 7 ml
Substrate B  1 x 7 ml
Stop Solution      1 x 7 ml
Standard  S1  S2  S3  S4  S5
Concentration
（ng/ml）
0.62  1.87  4.37  10  20 
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STORAGE
1.  Unopened  test  kits  should  be  stored  at  2-8°C  upon  receipt  and  the
microtiter plate should be kept in a sealed bag. The test kit may be used
throughout the expiration date of the kit. Refer  to  the package  label for
the expiration date.
2.  Opened  test  kits  will  remain  stable  until  the  expiring  date  shown,
provided it is stored as prescribed above.    
3.  A  microtiter  plate  reader  with  a  bandwidth  of  10  nm  or  less  and  an
optical  density  range  of  0-3  OD  or  greater  at  450nm  wavelength  is
acceptable for use in absorbance measurement.
OTHER SUPPLIES REQUIRED
  Microplate  reader  capable  of measuring  absorbance  at  450  nm, with
the correction wavelength set at 540 nm or 570 nm.
  Pipettes and pipette tips.
  Deionized or distilled water.
  Squirt bottle, manifold dispenser, or automated microplate washer.
SAMPLE COLLECTION AND STORAGE
  Serum    Use a serum separator  tube （SST） and allow samples  to clot
for 30 minutes before centrifugation for 15 minutes at 1000 x g. Remove
serum and assay  immediay or aliquot and store samples at  -20° C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles. 
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  Plasma    Collect  plasma  using  citrate,  EDTA,  or  heparin  as  an
anticoagulant. Centrifuge for 15 minutes at 1000 x g within 30 minutes
of collection. Assay immediay or aliquot and store samples at -20° C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: Grossly hemolyzed samples are not suitable for use in this assay.
ASSAY PROCEDURE
Bring all reagents and samples to room temperature before use. It is
recommended that all samples, standards, and controls be assayed in duplicate.
1.  Set a Blank well without any solution. Add 50µl of Standard or Sample
per well.  
2.  Add 50µl of HRP-Conjugate to each well （Not to Blank!）. Incubate for 1
hour at 37°C.
3.  Aspirate each well and wash,  repeating  the process  three  times  for a
total  of  three  washes. Wash  by  filling  each  well  with  ddH2O  （200µl）
using  a  squirt  bottle,  multi-channel  pipette,  manifold  dispenser  or
autowasher.  Complete  removal  of  liquid  at  each  step  is  essential  to
good  performance. After  the  last wash,  remove  any  remaining Wash
Buffer  by  aspirating  or  decanting.  Invert  the  plate  and  blot  it  against
clean paper towels.
4.  Add 50µl of Substrate A and 50µl Substrate B to each well. Incubate
for 15 minutes at 37°C. Keeping  the plate away  from  drafts and other
temperature fluctuations in the dark.
5.  Add  50µl  of  Stop  Solution  to  each  well.  If  color  change  does  not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing. 
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6.  Determine  the optical density of each well within 30 minutes, using a
microplate reader set to 450 nm.
CALCULATION OF RESULTS
Average the duplicate readings for each standard, control, and sample and
subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve
by reducing the data using computer software capable of generating a four
parameter  logistic  （4-PL） curve-fit. As an alternative, construct a standard
curve  by  plotting  the mean  absorbance  for  each  standard  on  the  y-axis
against the concentration on the x-axis and draw a best fit curve through the
points on  the graph. The data may be  linearized by plotting  the  log of  the
BDNF concentrations versus the log of the O.D. and the best fit line can be
determined  by  regression  analysis.  This  procedure  will  produce  an
adequate but less precise fit of the data. If samples have been diluted, the
concentration  read  from  the  standard  curve  must  be  multiplied  by  the
dilution factor.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
  The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.
  Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.
  If samples generate values higher than the highest standard, dilute the
samples and repeat the assay.
  Any  variation  in  operator,  pipetting  technique,  washing  technique,
incubation  time  or  temperature,  and  kit  age  can  cause  variation  in
binding. 
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  This assay  is designed  to eliminate  interference by soluble  receptors,
binding proteins, and other  factors present  in biological samples. Until
all  factors  have  been  tested  in  the  Quantikine  Immunoassay,  the
possibility of interference cannot be excluded.
TECHNICAL HINTS
  When mixing or reconstituting protein solutions, always avoid foaming.
  To avoid cross-contamination, change pipette tips between additions of
each standard  level, between sample additions, and between  reagent
additions. Also, use separate reservoirs for each reagent.
  When  using  an  automated  plate  washer,  adding  a  30  second  soak
period  following  the  addition  of wash  buffer,  and/or  rotating  the  plate
180 degrees between wash steps may improve assay precision.
  To  ensure  accurate  results,  proper  adhesion  of  plate  sealers  during
incubation steps is necessary.
  Substrate  Solution  should  remain  colorless  until  added  to  the  plate.
Keep Substrate Solution protected from light. Substrate Solution should
change from colorless to gradations of blue.
  Stop Solution  should be added  to  the plate  in  the  same order as  the
Substrate Solution. The color developed in the wells will turn from blue
to  yellow  upon  addition  of  the Stop Solution. Wells  that  are  green  in
color indicate that the Stop Solution has not mixed thoroughly with the
Substrate Solution.
 
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人腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 人腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 人腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 人腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）快速檢測(cè)試劑盒 快速檢測(cè)試劑盒 快速檢測(cè)試劑盒 快速檢測(cè)試劑盒
使用說(shuō)明書(shū) 使用說(shuō)明書(shū) 使用說(shuō)明書(shū) 使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品編號(hào)：CSB-E04501h
檢測(cè)范圍 檢測(cè)范圍 檢測(cè)范圍 檢測(cè)范圍： ：： ：0.62 ng /ml -20 ng /ml
zui低檢測(cè)限 zui低檢測(cè)限 zui低檢測(cè)限 zui低檢測(cè)限： ：： ：0.31 ng/ml
特異性 特異性 特異性 特異性： ：： ：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的 BDNF，且與其他相關(guān)蛋白基
本無(wú)交叉反應(yīng)。
有效期 有效期 有效期 有效期：6 個(gè)月（2-8℃避光保存）
預(yù)期應(yīng)用 預(yù)期應(yīng)用 預(yù)期應(yīng)用 預(yù)期應(yīng)用： ：： ：ELISA法定量測(cè)定人血清，血漿及其它相關(guān)生物液體中 BDNF
含量。
說(shuō)明 說(shuō)明 說(shuō)明 說(shuō)明  
1.  濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。  
2.  剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)
驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè) BDNF含量。首先用 BDNF抗體包被微
孔板，制備成固相載體，然后加入樣品（標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)標(biāo)本）同時(shí)加入酶標(biāo)
記的 BDNF 抗體，特異性地形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，加底物
顯色后在酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值（OD值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品的含量。 
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試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制  
1.  酶聯(lián)板 酶聯(lián)板 酶聯(lián)板 酶聯(lián)板（Assay plate ）：                                                              一塊 （96孔）。   
2.  標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品 標(biāo)準(zhǔn)品 （Standard）：                                                                     5×0.5ml/瓶。 
Standard 1  Standard 2  Standard 3  Standard 4  Standard 5
0.62ng/ml  1.87ng/ml  4.37ng/ml  10ng/ml  20ng/ml
3.  酶結(jié)合物 酶結(jié)合物 酶結(jié)合物 酶結(jié)合物（ （（ （HRP-conjugate） ）） ）：                                                      1×6ml/瓶。 
4.  顯色劑 顯色劑 顯色劑 顯色劑 A （ （（ （Substrate A）： ）： ）： ）：                                                               1×7ml/瓶。 
5.  顯色劑 顯色劑 顯色劑 顯色劑 B （ （（ （Substrate B）： ）： ）： ）：                                                               1×7ml/瓶。 
6.  終止液 終止液 終止液 終止液（ （（ （Stop Solution） ）） ）：                                                              1×7ml/瓶。 
需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材
1.  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2.  高速離心機(jī)
3.  電熱恒溫培養(yǎng)箱
4.  干凈的試管和 Eppendof 管
5.  系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器
6.  蒸餾水，容量瓶等
標(biāo)本的采集及保存 標(biāo)本的采集及保存 標(biāo)本的采集及保存 標(biāo)本的采集及保存
1.  血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜后于 1000 x g離心 20 分
鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍
融。
2.  血漿：可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后 30 分鐘內(nèi)于 2 - 8° C
1000 x g離心 15 分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)
凍融。
注 注注 注： ：： ：以上標(biāo)本置 以上標(biāo)本置 以上標(biāo)本置 以上標(biāo)本置 4℃ ℃℃ ℃保存應(yīng)小于 保存應(yīng)小于 保存應(yīng)小于 保存應(yīng)小于 1 周 周周 周， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃或 或或 或-80℃ ℃℃ ℃均應(yīng)密封保存 均應(yīng)密封保存 均應(yīng)密封保存 均應(yīng)密封保存， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃不應(yīng)超過(guò) 不應(yīng)超過(guò) 不應(yīng)超過(guò) 不應(yīng)超過(guò) 1 個(gè) 個(gè)個(gè) 個(gè)
月 月月 月， ，， ，-80℃ ℃℃ ℃不應(yīng)超過(guò) 不應(yīng)超過(guò) 不應(yīng)超過(guò) 不應(yīng)超過(guò) 2 個(gè)月 個(gè)月 個(gè)月 個(gè)月； ；； ；標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié) 標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié) 標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié) 標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果 果果 果， ，， ，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行檢 因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行檢 因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行檢 因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行檢
測(cè) 測(cè)測(cè) 測(cè)。 。。 。 
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操作步驟 操作步驟 操作步驟 操作步驟
1.  將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時(shí)。
2.  將酶標(biāo)板取出，設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔、不加任何液體；每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)依次各設(shè)
兩孔，每孔加入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 50ul；其余每個(gè)檢測(cè)孔直接加待測(cè)標(biāo)本 50ul。   
3.  每孔加入酶結(jié)合物 50ul（空白對(duì)照孔除外），充分混勻，貼上不干膠封片，
置 37℃溫育 1 小時(shí)。
4.  手工洗板，棄去孔內(nèi)液體。去離子水注滿(mǎn)各孔，靜置 10 秒甩干，重復(fù)三
次后拍干；洗板機(jī)洗板，選擇洗滌三次程序，洗板后拍干。
5.  每孔加顯色劑 A 液 50µl，顯色劑 B 液 50µl，振蕩混勻后，37℃避光顯色
15 分鐘，每孔加終止液 50µl。
6.  用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長(zhǎng) 450nm，先用空白孔調(diào)零點(diǎn)，然后測(cè)定各孔 OD
值。
數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)處理
1.  手工作圖：用雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫軸，以對(duì)應(yīng)的 0D值為縱
軸，畫(huà)出平滑曲線(xiàn)或直線(xiàn)，在曲線(xiàn)上按照待測(cè)血清 OD值找到對(duì)應(yīng)的濃度
值。
2.  計(jì)算機(jī)：使用線(xiàn)性擬合功能，應(yīng)將標(biāo)準(zhǔn)品 S1-S5 的濃度取對(duì)數(shù)（Log（濃
度））作為 X，將對(duì)應(yīng)的 OD值減去空白對(duì)照孔 OD值后取對(duì)數(shù)（Log（OD
值-NSB））作為 Y，進(jìn)行線(xiàn)性擬合。再?gòu)臄M合線(xiàn)上計(jì)算出待測(cè)血清濃度。
注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng)
1.  從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及所需預(yù)包被板條應(yīng)置室溫
（18-25℃）平衡 30 分鐘后方可使用，余者應(yīng)及時(shí)封好口，放回 2-8℃中避
光保存，以備后用。
2.  使用前試劑應(yīng)搖勻。
3.  結(jié)果判斷須在反應(yīng)終止后 10 分鐘內(nèi)完成。
4.  不同批號(hào)的試劑不可混用。
5.  加樣時(shí)應(yīng)注意避免所用各試劑及樣品之間的交又污染。
6.  操作時(shí)，試劑盒內(nèi)每種試劑各使用一個(gè)吸頭，每一種標(biāo)準(zhǔn)品使用一個(gè)吸頭，
每一個(gè)樣品各使用一個(gè)吸頭，吸頭一次性使用。        
 

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