ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，LT Elisa kit特別是固相載體的包被難達(dá)到各個體之間的*，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，LT Elisa kit中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

LT Elisa kit技術(shù)操作要點(diǎn)：

1. 標(biāo)本的采取和保存。
2. 試劑的準(zhǔn)備
3. 加樣。
4. 保溫。
5. 洗滌。
6. 顯色和比色。
7. 酶標(biāo)比色儀。
8. 結(jié)果判斷。

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。LT Elisa kit蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，LT Elisa kit直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時），以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、*等作預(yù)包被，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素*系統(tǒng)作間接包被，LT Elisa kit即用親和素先包被載體，然后加入*化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。

脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

LT Elisa kit相關(guān)產(chǎn)品*：xyD076Hu    人碳酸酐酶Ⅸ(CA9)檢測試劑盒    ELISA Kit for Carbonic Anhydrase IX (CA9)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyC945Hu    人褪黑素受體1A(MTNR1A)檢測試劑盒    ELISA Kit for Melatonin ReHZptor 1A (MTNR1A)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB334Hu    人β-1,3-葡糖醛酸基移酶1(β3GAT1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Beta-1,3-Glucuronyltransferase 1 (b3GAT1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyC788Hu    人端粒重復(fù)結(jié)合因子1(TERF1)檢測試劑盒    ELISA Kit for omeric Repeat Binding Factor 1 (TERF1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyD534Hu    人褪黑素受體1B(MTNR1B)檢測試劑盒    ELISA Kit for Melatonin ReHZptor 1B (MTNR1B)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyD866Hu    人松弛素/胰島素樣肽受體3(RXFP3)檢測試劑盒    ELISA Kit for Relaxin/Insulin Like Family Peptide ReHZptor 3 (RXFP3)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyD949Hu    人RAR相關(guān)孤兒素受體γ(RORγ)檢測試劑盒    ELISA Kit for RAR Related Orphan ReHZptor Gamma (RORg)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyE433Hu    人溶質(zhì)載體家族16成員3(SLC16A3)檢測試劑盒    ELISA Kit for Solute Carrier Family 16, Member 3 (SLC16A3)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyF183Hu    人11-β-羥基類固醇脫氫酶2(HSD11β2)檢測試劑盒    ELISA Kit for 11-Beta-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 2 (HSD11b2)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyF384Hu    人端粒重復(fù)結(jié)合因子2(TERF2)檢測試劑盒    ELISA Kit for omeric Repeat Binding Factor 2 (TERF2)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyH718Hu    人*豐富重復(fù)FLII相互作用蛋白1(LRRFIP1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Leucine Rich Repeat In FLII Interacting Protein 1 (LRRFIP1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyK108Hu    人端粒保護(hù)1同源物(POT1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Protection Of omeres 1 Homolog (POT1)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyW764Hu    人含*豐富重復(fù)蛋白3C(LRRC3C)檢測試劑盒    ELISA Kit for Leucine Rich Repeat Containing Protein 3C (LRRC3C)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyL817Hu    人無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員4(WNT4)檢測試劑盒    ELISA Kit for Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 4 (WNT4)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyM113Hu    人含RCC1和BTB域蛋白2(RCBTB2)檢測試劑盒    ELISA Kit for RCC1 And BTB Domain Containing Protein 2 (RCBTB2)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyM285Hu    人類固醇5α還原酶2(SRD5α2)檢測試劑盒    ELISA Kit for Steroid 5 Alpha Reductase 2 (SRD5a2)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyM701Hu    人含SET域蛋白7(SETD7)檢測試劑盒    ELISA Kit for SET Domain Containing Protein 7 (SETD7)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyN696Hu    人赫曼斯基普德拉克綜合征蛋白6(HPS6)檢測試劑盒    ELISA Kit for Hermansky Pudlak Syndrome Protein 6 (HPS6)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyN806Hu    人*蛋白酶50(PRSS50)檢測試劑盒    ELISA Kit for Protease, Serine 50 (PRSS50)     檢測范圍：9.375-1000pg/ml