ELSIA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，RAGE/AGER Elisa kit特別是固相載體的包被難達到各個體之間的*，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，RAGE/AGER Elisa kit中央較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

RAGE/AGER Elisa kit技術(shù)操作要點：

1. 標本的采取和保存。
2. 試劑的準備
3. 加樣。
4. 保溫。
5. 洗滌。
6. 顯色和比色。
7. 酶標比色儀。
8. 結(jié)果判斷。

將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。RAGE/AGER Elisa kit蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，RAGE/AGER Elisa kit直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合?？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時），以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、*等作預(yù)包被，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素*系統(tǒng)作間接包被，RAGE/AGER Elisa kit即用親和素先包被載體，然后加入*化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。

脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

RAGE/AGER Elisa kit相關(guān)產(chǎn)品*：xyA451Hu    人*5(KLK5)檢測試劑盒    ELISA Kit for Kallikrein 5 (KLK5)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA570Hu    人Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)檢測試劑盒    ELISA Kit for Procollagen I C-Terminal Propeptide (PICP)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA571Hu    人Ⅰ型膠原(COL1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Collagen Type I (COL1)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyB951Hu    人43kDa Tar DNA結(jié)合蛋白(TDP43)檢測試劑盒    ELISA Kit for Tar DNA Binding Protein 43kDa (TDP43)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
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xyC012Hu    人二氫嘧啶脫氫酶(DPYD)檢測試劑盒    ELISA Kit for Dihydropyrimidine Dehydrogenase (DPYD)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyC014Hu    人趨化因子C-C-基元受體6(CCR6)檢測試劑盒    ELISA Kit for Chemokine C-C-Motif ReHZptor 6 (CCR6)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA193Hu    *(FG)檢測試劑盒    ELISA Kit for Fibrinogen (FG)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA862Hu    人補體成分2(C2)檢測試劑盒    ELISA Kit for Complement Component 2 (C2)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA457Hu    人胱天蛋白酶14(CASP14)檢測試劑盒    ELISA Kit for Caspase 14 (CASP14)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA468Hu    人衰變加速因子(DAF)檢測試劑盒    ELISA Kit for Decay AcHZlerating Factor (DAF)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA471Hu    人骨鈣素(OC)檢測試劑盒    ELISA Kit for Osteocalcin (OC)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA472Hu    人降鈣素(CT)檢測試劑盒    ELISA Kit for Calcitonin (CT)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA473Hu    人C組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPC)檢測試劑盒    ELISA Kit for Xeroderma Pigmentosum, Complementation Group C (XPC)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA474Hu    人甲狀旁腺素受體2(PTHR2)檢測試劑盒    ELISA Kit for Parathyroid Hormone ReHZptor 2 (PTHR2)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA475Hu    人*受體(VDR)檢測試劑盒    ELISA Kit for Vitamin D ReHZptor (VDR)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA478Hu    人心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)檢測試劑盒    ELISA Kit for Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA479Hu    人肌酸激酶MB同工酶(CKMB)檢測試劑盒    ELISA Kit for Creatine Kinase MB Isoenzyme (CKMB)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA480Hu    人肌紅蛋白(MYO)檢測試劑盒    ELISA Kit for Myoglobin (MYO)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA483Hu    人內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1(EHZ1)檢測試劑盒    ELISA Kit for Endothelin Converting Enzyme 1 (EHZ1)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml    
xyA484Hu    人氨基端前心鈉肽(NT-ProANP)檢測試劑盒    ELISA Kit for N-Terminal Pro Atrial Natriuretic Peptide (NT-ProANP)    檢測范圍：9.375-1000pg/ml