PI 凋亡檢測試劑盒操作詳情

 
產品說明：

細胞凋亡是細胞的基本特征之一，在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一種分子量為 35.8 KD 的 Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的磷脂酰絲胺酸（Phosphatidylserine, PS）高親和力特異結合。FITC-Annexin V 結合到凋亡細胞后，在藍色光的激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光，區(qū)分出凋亡細胞與正常細胞。dian化丙啶（Propidium iodide，PI）是一種核酸染料，它不能穿透完整細胞膜，但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透，并使細胞核紅染。將 FITC-Annexin V 與 PI 匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞區(qū)分開來。

操作方法：

1、 用 27ml 的去離子水稀釋 3ml Binding Buffer（10×）至 30ml，每次用 3ml。

2、 收集細胞（1×106 個/次），然后用冷的 PBS 洗滌。（對于貼壁細胞，先用胰酶消化，再用 PBS 洗滌）。

3、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 懸浮細胞，300×g 離心 10min，棄上清。

4、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 重懸細胞，使細胞的密度達到 1×106 個/ml。

5、 每管加入 100μL 細胞（1×105 個）。

6、 再向管中加入 5μL Annexin V-FITC。

7、 室溫，避光，輕輕地混勻，10min。

8、 加入 5μL PI，室溫，避光，孵育 5min。

9、 加入 PBS 至 500μL，輕輕混勻。

10、在 1 小時內用流式細胞儀檢測。1、 用 27ml 的去離子水稀釋 3ml Binding Buffer（10×）至 30ml，每次用 3ml。

2、 收集細胞（1×106 個/次），然后用冷的 PBS 洗滌。（對于貼壁細胞，先用胰酶消化，再用 PBS 洗滌）。

3、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 懸浮細胞，300×g 離心 10min，棄上清。

4、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 重懸細胞，使細胞的密度達到 1×106 個/ml。

5、 每管加入 100μL 細胞（1×105 個）。

6、 再向管中加入 5μL Annexin V-FITC。

7、 室溫，避光，輕輕地混勻，10min。

8、 加入 5μL PI，室溫，避光，孵育 5min。

9、 加入 PBS 至 500μL，輕輕混勻。

10、在 1 小時內用流式細胞儀檢測。
 

注意事項：

1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2、Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質，在保存與操作時請注意避光。

3、Propidium iodide（PI）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。

4、在細胞洗滌的zui后一步，請盡量將上清棄凈，以免 PBS 殘留影響實驗結果

5、PI 染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首行 Annexin V-FITC 染色，上機前 5分鐘再加入 PI 染色。

6、整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在 4℃下操作。

PI 凋亡檢測試劑盒操作詳情