大鼠雄烯二酮（ASD）elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
0.5nmol/L- 16nmol/L
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中雄烯二酮（ASD）含量。
實驗原理
    大鼠雄烯二酮（ASD）Elisa試劑盒說明書本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠雄烯二酮（ASD）水平。用純化的大鼠雄烯二酮（ASD）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雄烯二酮（ASD），再與HRP 標記的雄烯二酮（ASD）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雄烯二酮（ASD）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光
度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠雄烯二酮（ASD）濃度。
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。Elisa試劑盒
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。Elisa試劑盒