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小鼠脾臟DC的分離方法

時(shí)間:2015-10-19閱讀:2974
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    小鼠脾臟DC是研究zui多的淋巴組織DC,其特征為組成性表達(dá)MHC-II類分子和CD11c。該細(xì)胞群可進(jìn)一步分為三群:主要分布于邊緣區(qū)的CD4+CD8-CD11b+DC,主要分布于T細(xì)胞區(qū)的CD4-CD8+CD11b-DC和雙陰性DC----CD4-CD8+CD11b+。其中,CD8+DC表達(dá)CD1d和DEC-205。我們可以根據(jù)需要選擇不同的方法將脾臟DC分選出來。

(一)貼壁法

    小鼠脾臟DC在體外可黏附于玻璃或塑料表面,但培養(yǎng)18-24h后,其黏附能力喪失,借此可與巨噬細(xì)胞分離。該方法無需特殊試劑,不需要進(jìn)行密度梯度離心,操作簡單、省時(shí)。但用此方法獲取的DC數(shù)量少,純度低,而且分離所得的DC處于不同的分化階段,無法滿足精細(xì)實(shí)驗(yàn)的需要。

(二)磁珠分選法

    CD11c表達(dá)于所有已知小鼠DC表面,所以將包被了磁珠的CD11c抗體與小鼠淋巴組織或非淋巴組織懸液共孵育并置于磁場后,結(jié)合了CD11c抗體的細(xì)胞將留在分選柱中,脫離磁場后可分離得到CD11c陽性的DC。該方法簡單易行,若操作得當(dāng),細(xì)胞純度可以達(dá)到95%以上。但需購置相應(yīng)分選設(shè)備及試劑,花費(fèi)較高。

(三)流式細(xì)胞儀分選

    DC表面表達(dá)多種相對特異性的表面標(biāo)志,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,選用某些特定表面標(biāo)志的單克隆熒光抗體作標(biāo)記,明確目的細(xì)胞群,通過流式細(xì)胞儀做自動分選。

    該方法可以根據(jù)多個(gè)標(biāo)記進(jìn)行細(xì)胞分選,彌補(bǔ)了MACS分選的不足,而且分離得到的DC細(xì)胞純度更高。但是采用FCM分選目前存在的主要問題是DC的種類很多,發(fā)育的過程和表面特征標(biāo)志目前尚未*清楚。因此,在做DC分離時(shí),必須視標(biāo)本來源及目的細(xì)胞選擇合適的單克隆抗體精選標(biāo)記。另外,進(jìn)行流式分選必須購置具有分選功能的流式細(xì)胞儀,價(jià)格昂貴,對操作人員的技術(shù)也有較高要求。

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