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上海研生生化試劑有限公司

細胞株的培養(yǎng)

時間:2016-4-6閱讀:398
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   選擇培養(yǎng)基沒有一定的標準,有幾點建議可供參考: (1)建立某種細胞株所用的培養(yǎng)基應該是培養(yǎng)這種細胞的培養(yǎng)基??梢圆殚唴⒖嘉墨I,或在購買細胞株時咨詢。 (2)其它實驗室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基可以適合多種細胞。 (3)根據(jù)細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養(yǎng)基。如小

選擇培養(yǎng)基沒有一定的標準,有幾點建議可供參考:

(1)建立某種細胞株所用的淋巴細胞培養(yǎng)基應該是培養(yǎng)這種細胞的培養(yǎng)基??梢圆殚唴⒖嘉墨I,或在購買細胞株時咨詢。

(2)其它實驗室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基可以適合多種細胞。

(3)根據(jù)細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細胞株多選 RPMI1640 。

(4)用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細胞,觀察其生長狀態(tài),可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷,根據(jù)實驗結果選擇培養(yǎng)基,這是zui客觀的方法,但比較繁瑣。

     很多細胞生長要求在培養(yǎng)液中添加*。*在溶液中很不穩(wěn)定,應置于-20?C冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中。加有*的液體培養(yǎng)基4?C 冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的*。另一種選擇是使用L-*的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide(如啟維益成公司代理的GenDepot的產(chǎn)品Glutaplex配方中含有的成分之一) 替代L-*。Glutaplex與L-*相比更加穩(wěn)定,降解比較慢,提高細胞的存活和生長,極大降低對細胞有毒性的氨的積累。

3.培養(yǎng)基中是否應加酚紅:

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑,中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,特別是雌激素。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞尤其是哺乳類細胞時,應使用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時不使用加酚紅的培養(yǎng)基。

4.使用血清應注意的問題:

1)血清*次使用前,是否應在56oC,30分鐘加熱血清以滅活補體系統(tǒng)?

激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞生長只有微小的促進或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率降低。而經(jīng)過熱處理的血清沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染。而把血清放在37℃環(huán)境中又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質(zhì)量。

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