基因克隆的本質(zhì)是使目的基因在特定的條件下得到擴(kuò)增和表達(dá)，而目的基因本身無(wú)法進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)、不易進(jìn)入受體細(xì)胞、不能穩(wěn)定維持，所以就必須借助于“載體”及其“寄主細(xì)胞”來(lái)實(shí)現(xiàn)。

作為基因克隆的載體必須具備以下特性：

⑴載體必須是復(fù)制子。

⑵具有合適的篩選標(biāo)記，便于重組子的篩選。

⑶具備多克隆位點(diǎn)（MCS），便于外源基因插入。

⑷自身分子量較小，拷貝數(shù)高。

⑸在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定性高。

一、質(zhì)粒載體

（一）質(zhì)粒的生物學(xué)特性

（1）質(zhì)粒是獨(dú)立于染色體以外的能自主復(fù)制的裸露的雙鏈環(huán)狀(少數(shù)為線(xiàn)形和RNA） DNA分子。

    廣泛從在于細(xì)菌細(xì)胞中，比病毒更簡(jiǎn)單。在霉菌、藍(lán)藻、酵母和一些動(dòng)植物細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了質(zhì)粒，目前對(duì)細(xì)菌的質(zhì)粒研究得比較深入，特別是大腸桿菌的質(zhì)粒。大腸桿菌的質(zhì)粒主要有F質(zhì)粒（F因子）、R質(zhì)粒（抗藥性因子）和Col質(zhì)粒（大腸桿菌素因子）三種。

（2）質(zhì)粒的大小差異很大，zui小的只有1kb,只能編碼中等大小的2-3種蛋白質(zhì)分子，zui大的達(dá)到200kb。

（3）質(zhì)粒的生存在寄主細(xì)胞中“友好”地“借居”，離開(kāi)了寄主它本身無(wú)法復(fù)制；同時(shí)質(zhì)粒往往有宿主專(zhuān)一性，如大腸桿菌的復(fù)制起點(diǎn)不一定能在其它生物細(xì)胞中繁殖。

（4）質(zhì)粒的復(fù)制類(lèi)型一種質(zhì)粒在宿主細(xì)胞中存在的數(shù)目稱(chēng)為該質(zhì)粒的拷貝數(shù)。據(jù)拷貝數(shù)將質(zhì)粒分為兩種復(fù)制型：“嚴(yán)緊型”質(zhì)粒（stigent plasmid）,拷貝數(shù)為1-3；“松弛型”質(zhì)粒（relaxed plasmid）,拷貝數(shù)為10-60。不過(guò)即使是同一質(zhì)粒，其拷貝數(shù)在不同的寄主細(xì)胞間和不同的生長(zhǎng)環(huán)境也可能有很大的變化。

（5）質(zhì)粒的不親和性 兩種親緣關(guān)系密切的不同質(zhì)粒不能在同一宿主細(xì)胞中穩(wěn)定共存。載體質(zhì)粒與受體的質(zhì)粒應(yīng)是不同的不親和群。

⑹ 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移

    轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒，含有tra基因；能通過(guò)結(jié)合作用從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)胞。

    非轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒，不含tra基因；可以為轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒所帶動(dòng)轉(zhuǎn)移。

（7）質(zhì)粒的存在形式有超螺旋、開(kāi)環(huán)雙螺旋和線(xiàn)狀雙螺旋三種，