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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>我司剖析 :關(guān)于抗原修正辦法
至今停止,抗原修正有許多種辦法,在這些辦法中,有的是依據(jù)抗體的要求來進(jìn)行,有的是依據(jù)抗原的表達(dá)程度來進(jìn)行,我們則對每種病例每項(xiàng)檢測,都要求有必要進(jìn)行抗原修正,以到達(dá)抗原全面表達(dá)的*佳狀態(tài)。
1. 真空負(fù)壓抗原修正法:
① 切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇真空負(fù)壓處理5分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0),真空負(fù)壓干燥箱預(yù)先調(diào)至95 ℃,真空負(fù)壓處理10分鐘。
⑤待修正注降至室溫的一,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組化染色辦法進(jìn)行染色。
2. 微波輻射抗原修正法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④ 0.01 M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0),于微波爐內(nèi)微波輻射10分鐘,如檢測Er和Pr則需求20輻射分鐘左右。
⑤待修正液降至室溫后,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學(xué)的染色辦法進(jìn)行染色。
3. 高壓抗原修正法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④切片放入抗原修正液中,邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后繼續(xù)1-4分鐘。
⑤待修正液康復(fù)至室溫后,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色辦法進(jìn)行染色。
4. 隔水熱抗原修正法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④切片放入0.01 M檸檬酸鹽緩沖液(PH0.6)中,邊同容器一起放入水溶鍋中加熱,其間應(yīng)不斷用溫度計(jì)測其溫度,待抗原修正液的溫度到達(dá)有用溫度后(92 ℃)。即開始計(jì)時(shí),繼續(xù)40分鐘。
⑤待抗原修正液康復(fù)至室溫后,PBS洗3次,隨后按選定好的免疫組化染色辦法進(jìn)行染色。
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