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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>今日解說:關(guān)于ELISA 酶結(jié)合物的制備方法
※ ELISA 酶結(jié)合物免疫酶技能又稱酶免疫測(cè)定法,是繼免疫熒光技能和放射免疫技能后發(fā)展起來的又一種免疫符號(hào)技能。
※ 它是把抗原抗體的特異性反響和酶的高效催化作用相結(jié)合而樹立的。該技能通過化學(xué)辦法將酶與抗體或抗抗體結(jié)合,構(gòu)成酶符號(hào)物,這些酶符號(hào)物仍保持免疫學(xué)活性和酶的活性。
※ 然后將它與相應(yīng)的抗體或抗原起反響,構(gòu)成酶符號(hào)復(fù)合物,結(jié)合在免疫復(fù)合物上的酶,在遇到相應(yīng)的底物時(shí),則催化底物產(chǎn)生水解、氧化或還原等反響,而生成可溶性或不溶性有色物質(zhì)。
※ 然后依據(jù)顯色的深淺來反映待測(cè)樣品中抗原或抗體的含量,如生成的有色物質(zhì)為可溶性,則可用肉眼比色或酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)定光密度值(OD)定性或定量。
※ 如生成的有色物質(zhì)為不溶性沉淀物,一起又是電子致密物質(zhì),則可用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡辨認(rèn)和定位。因而,免疫酶技能是一項(xiàng)定位、定性和定量(敏感度可達(dá)每毫升ng~pg水平)的歸納技能。
ELISA 酶結(jié)合物注意以下原因:
① 裝備對(duì)照品溶液的容器或溶劑被污染。
② 盛放活動(dòng)相的容器或裝備溶劑被污染。
③ 進(jìn)樣器被污染。
④ 高效液相進(jìn)樣閥被污染。
⑤ 色譜柱填充物出現(xiàn)開裂等。
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