1.吸除培育瓶?jī)?nèi)舊培育液。
2.參加無(wú)菌pbs洗液（5-8mL）輕輕潮濕細(xì)胞，稀釋多余的培育基，之后吸走洗液，動(dòng)作要輕，不可吹打到細(xì)胞。
3.向瓶?jī)?nèi)參加含0.25%EDTA的*混合液少量，以能覆滿瓶底為限。 
4.置溫箱中2~5分鐘，一旦鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，細(xì)胞變圓，比較松動(dòng)后，當(dāng)即停止消化。
5.參加該細(xì)胞對(duì)應(yīng)的培育基6mL（T25培育瓶）或12mL（T75培育瓶）停止消化。
6.用吸管通過汲取的培育基輕輕重復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離構(gòu)成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)應(yīng)盡量以少的次數(shù)將細(xì)胞從壁上吹下，不僅要操控吹打的力度、次數(shù)，還要注意要將細(xì)胞盡可能吹成單個(gè)。這樣既能減少死細(xì)胞，又能便于細(xì)胞再次均勻貼壁成長(zhǎng)。
7.根據(jù)傳代比例，將細(xì)胞懸液分瓶，再?gòu)浹a(bǔ)培育基后，靜置于溫箱培育，直止貼壁。
貼壁細(xì)胞在培育瓶長(zhǎng)成致密單層后，持續(xù)成長(zhǎng)的空間缺乏，培育基中的養(yǎng)分成份也消耗較多，一起代謝廢物也有較多堆積，需求分瓶培育，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增。對(duì)于貼壁不太緊的細(xì)胞如293，可以直接吹散后分瓶。而對(duì)于貼壁較緊的細(xì)胞如CHO，則需求以*消化后再吹散分瓶。以筆者的經(jīng)歷，以輕吹或加培育液后輕搖可下較好，但對(duì)于經(jīng)歷不太充沛的實(shí)驗(yàn)者而言是較難判斷把握的。