確定有無(wú)凋亡可用Annexin v-PI 雙染，因?yàn)樵摲椒▽?duì)早期凋亡比較敏感，如果沒測(cè)出明顯的凋亡，換別的也可能測(cè)不出。
用Annexin v-PI 雙染測(cè)出凋亡后，可根據(jù)標(biāo)本或樣品情況選擇其它的方法來(lái)驗(yàn)證，但我認(rèn)為這并不是必須的，很多高質(zhì)量的paper也只用一種方法測(cè)凋亡。當(dāng)然你也要根據(jù)你下一步的實(shí)驗(yàn)需要，如果你想進(jìn)一步確定該凋亡是線粒體途徑還是死亡受體途徑，你可以檢測(cè)相應(yīng)的caspase或選擇線粒體途徑的試劑盒等等。
zui簡(jiǎn)單的是形態(tài)學(xué)的檢測(cè)，Hoechst染色，用熒光顯微鏡觀察，很便宜，200多塊買的染料，做到死也用不完，加上如果你的凋亡形態(tài)好，出的圖像也漂亮，周期也短，很直接就可以看到結(jié)果。還有大家都選擇的是DNAladder，步驟是很簡(jiǎn)單，不過(guò)要想真的做出漂亮的LADDER可能還需要下不少的功夫，還有一種是流式細(xì)胞來(lái)檢測(cè)，也不算貴，這三種應(yīng)該都是用的非常多的。
細(xì)胞凋亡過(guò)程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：
Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；
Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；
Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體
正常細(xì)胞和早、中期調(diào)亡細(xì)胞均可被Hoechst著色。
正常細(xì)胞核的Hoechst著色的形態(tài)呈圓形，淡蘭色，內(nèi)有較深的藍(lán)色顆粒；
調(diào)亡細(xì)胞核由于濃集而呈亮蘭色，或核呈分葉，碎片狀。