細(xì)胞復(fù)蘇辦法:
一.應(yīng)遵守慢凍快融的準(zhǔn)則.先將水溫鍋調(diào)至37-37.5度,取出凍存的細(xì)胞迅速放入后交細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.
二.在無菌臺內(nèi)將*培育基參加50ml的小培育瓶內(nèi),約5ml左右,然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞,置培育并內(nèi)輕輕搖晃,使細(xì)胞均勻后置培育箱內(nèi)培育.

操作前需做好的前期準(zhǔn)備工作：
1.消化液(pH7.8)或其它參加液,使用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌,分裝成支置-20度保存;
2.培育箱應(yīng)先用清水清洗后用75%酒精擦洗一遍(如有紫外線的應(yīng)照耀1小時以上,如有高溫滅菌的應(yīng)按程序來菌).至少每月一次.
3.玻璃吸管和玻璃培育瓶的消毒:1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上;2)干烤消毒140度2小時以上;
4.無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦洗潔凈,紫外線照耀40分鐘以上;各種培育板照耀3小時以上;
5.培育基(pH7.2)和血清制造好后要做無菌實(shí)驗(yàn):將血清按10%參加培育基內(nèi),用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培育基5-10ml置培育箱內(nèi)培育2-3天,肉眼見無渾濁或沉積等異物.分裝后置-20度保存;
6.進(jìn)入操作時應(yīng)留意先清洗雙手及手腕,然后用75%酒精擦洗,操作時留意無菌臺內(nèi)空間層次.手及物品不要在暴露的瓶口上方交游,假如數(shù)量較多,培育瓶應(yīng)放在與酒精燈平行當(dāng)?shù)乇阌诓僮?瓶與瓶之間應(yīng)相隔一定的距離,開瓶(蓋)時應(yīng)先用75%酒精重復(fù)擦洗或用燈燒,開開后使用燈先燒口,然后燒蓋.用完后同樣操作.整個操作過程盡量在無菌臺靠里面一點(diǎn).