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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA試劑盒應(yīng)用及實驗前準(zhǔn)備

時間:2016-10-20閱讀:243
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ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。
ELISA試劑盒試劑特點——Elisa試驗敏感性高,特異性強,重復(fù)性好。
ELISA試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素。
ELISA試劑盒ELISA原理——ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中,通過不同的設(shè)計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
ELISA試劑盒檢測前準(zhǔn)備工作
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液。(加熱溫度不要超過50℃)使用時洗滌液應(yīng)為室溫。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 加入標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本稀釋液1.0ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置10分鐘,待其充分溶解后,輕輕混勻(濃度為5000 pg/ml)。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度: 2500、1250、625、312.5、156.2、78.1、39.05、0 pg/ml。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml。如配制2500pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml (不要少于0.5ml )5000pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
4. *化抗體工作液:實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量(以100μl/孔計),實際配制時應(yīng)多配制100-200μl。使用前15分鐘,以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。
5. ELISA試劑盒酶結(jié)合物工作液:實驗前計算當(dāng)次實驗所需用量(以100μl/孔計),實際配制時應(yīng)多配制 100-200μl。使用前15分鐘,以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

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