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技術(shù)文章

豚鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書

閱讀:233發(fā)布時間:2015-6-8

雞外周血淋巴細(xì)胞分離液
說明:適用于從血液中分離所需細(xì)胞。
豚鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書密度:1.0900±0.0001g/ml
儲存條件:15-25℃避光保存,啟封后置4℃保存。


豚鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液
豚鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液
通用名稱:豚鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液
【預(yù)期用途】 
適用于從人抗凝血液中分離單個核細(xì)胞(主要為淋巴細(xì)胞),無菌條件下所分離的細(xì)胞可用于免疫學(xué)檢測。
豚鼠外周血淋巴【檢驗原理】 
外周血中單個核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等細(xì)胞,其體積、形態(tài)和密度與其他細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和白細(xì)胞等細(xì)胞密度較大,為 1.090 g/ml 左右,而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為 1.075~1.090 g/ml,血小板為 1.030~1.035 g/ml。
為此,本公司將葡聚糖(右旋糖酐)和**按一定比例混合,調(diào)整比重、pH 值和滲透壓,經(jīng)過澄清及除菌過濾后制成一種密度在 1.077g/ml 并且近于等滲的溶液(分層液),經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將各種血細(xì)胞加以分離。
【檢驗方法】 
取新鮮抗凝血 1ml,與注射用生理鹽水 1:1 混勻后,小心加于 2ml 的細(xì)胞分離液之液面上,以 400g 離心(半徑 15cm 水平轉(zhuǎn)子)20 分鐘,此時離心管中由上至下細(xì)胞分四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。收集第二層細(xì)胞放入含注射用生理鹽水 4-5毫升的試管中,充分混勻后, 400g,離心 20 分鐘。沉淀經(jīng)反復(fù)洗 2 次即得所需細(xì)胞。(此方法豚鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書效果較好,推薦使用) 
【主要組成成份】 
本品為帶有乳光或微乳光的注射水溶液,主要組成成份是葡聚糖(右旋糖酐)與**。 
【儲存條件及有效期】 
18-25℃避光保存,有效期 2 年。啟封后置 4℃保存,有效期 1 周。本品為真空包裝,未啟封前置于 10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【適用儀器】 
 半徑 15cm 水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)。 
【樣本要求】 
本分離液要求血液為新鮮的抗凝血,血液收集時應(yīng)無菌操作且在儲存、處理和運輸過程中避免冷凍和冷藏。 
【參考值(參考范圍)】
收集淋巴細(xì)胞的純度大于 80%。 
【檢驗結(jié)果的解釋】 
由于各品牌離心機(jī)的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心的時間,摸索*的分離條件(具體分離條件各實驗室自定)。
【檢驗方法的局限性】 
本試驗要求,在正常大氣壓下,樣本、分離液及分離環(huán)境溫度為 20℃± 2℃。
本分離液在低溫時呈較高密度,在高溫時呈較低密度。 
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 
密度 1.077 ± 0.001g/ml 
pH 7.0-7.5 
滲透壓 280-340mOsmol/kg 
400g,離心
20 分鐘
內(nèi)毒素 <0.06EU/ml 
無菌直接接種培養(yǎng)14天后培養(yǎng)基澄清澄明度及不溶性顆粒物每50ml溶液中含10μm以上的不溶性微粒20粒以下,含25μm以上的不溶性微粒5粒以下
【注意事項】 
1.啟封后應(yīng)置 4℃保存,避免微生物的污染。 
2.細(xì)胞分離液從冰箱取出后,不可立即使用,需待溶液溫度升至室溫時,搖勻
后使用。 
3.豚鼠外周血淋巴細(xì)胞分離液說明書整個分離過程中,溫度應(yīng)控制在 20℃± 2℃且在無菌環(huán)境下進(jìn)行,避免微生
物的污染,否則會影響分離質(zhì)量。 


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